前言 在哺乳动物中，细胞分化周期由Cdks直接控制，Cdks由各种调控蛋白控制，包括Cyclins激酶和磷酸及cdk抑制物。p27^Kip1是一个cdk抑制物，通过结合在CyclinE/cdk2复合体上，调控细胞周期中G1期到S期进展，从而抑制此激酶。活体研究已证明缺乏p27^Kip1的大鼠体重增加，多器官增生及垂体瘤发生率高提示p27^kip1在调控细胞生长中起作用，有可能是潜在的肿瘤抑制基因。尽管深入研究显示在人类肿瘤中很少有p27^kip1变异，但是在人类常见的乳腺癌、直肠癌、前列腺癌及肺癌中有p27^kip1表达缺失或p27^kip1蛋白低调节。已证明p27^kip1表达水平与肿瘤细胞进展呈负相关，并证明是一个前面提到的肿瘤的独立性预后预测因素。 尽管状胰腺癌是一个致死性疾病，很少有5年生存的报道，更严重的是在过去几十年里全世界发病率逐渐升高。尽管外科根治术为局限性肿瘤提供唯一治愈机会，因大多数患者在术后2年死亡，确定预后因素不但应提供乐观的治疗方向，也应是开展新的治疗策略的指南，目前有关胰腺癌p27^kip1蛋白水平的研究报道极少。为此我们探究胰腺癌中p27^kip1蛋白的表达情况及临床意义。用36例胰腺癌切除标本进行抗p27^kip1抗体及通过S-P免疫染色评估肿瘤细胞增生的研究，其中包括1例囊腺癌和3例粘液癌患者。发现p27^kip1表达缺失，可预测胰腺癌患者的不良预后。 材料和方法 一般资料 选择在中国医科大学附属二院普外科手术切除治疗的36例胰腺癌患者存档腊块，时间从1994年一220年2月，其中男23例，女13例，年龄32－78岁，平均61岁。36例胰腺癌均经病理证实(HE染色人根据日本胰腺癌协会制定的胰腺癌研究总则判定组织学类型。淋巴结转移状况及疾病分期。根据切除的标本测定肿瘤大小，并分为L ocm组和＞L ocm组，根据 TNM分期将肿瘤细胞的分化撒好、中度、差三种程度，包括 23例男性及 13例女性，平均年龄 61．0岁（标准差 11．3岁，区间 30－79岁人 36例患者中1例为囊腺癌，3例为粘液癌＊ 例患者的手术认定为治愈。根据在胰周软组织O 人）或胰腺O人人切除边缘10nun之内，显微镜下阴性发现。11例患者包括1例粘液癌患者死于术后并发症，被排除在生存分析之外，随访平均时限为25个月，中段为13个月(区间2－120个月＊没有一人接受相关辅助治疗。 将36例存档腊块分切成4pm厚在切片，准备进行染色，照下述步骤进行： －p27”‘蛋白和 Ki－67抗体的免疫组化染色 为确定 P27M‘在正常组织中的表达模式用鼠抗 P27“”‘单克隆抗体进行预实验，取3块正常胰腺组织(来源器官移植尸体供体，经HE染色证实为正常胰腺组织人经适当及可重复的染色获得正常胰岛及胰管的染色模式，在此研究应用标准染色方案，脱腊的切片浸入 10一粒柠檬酸钠缓冲液 PH6．0中，并在高压锅中煮沸＊5州，灭火后将切片放于抗P27帅‘液中孵育，4T过夜后加人生物素抗鼠免疫球蛋白，最后DAB显色，苏木精复染。预实验发现在90％胰岛内分泌细胞及多数浸润淋巴细胞中有P27御‘的正常表达，并做为阳性对照。阴性对照组是将开始的一抗替代为鼠血清hi－67抗原的免疫组化染色。 p27阿‘表达及肿瘤细胞增殖的评估 每例中 P27御’蛋白水平评估，通过记数 400倍光镜下阳性染 ·2·色的肿瘤细胞核，并通过阳性肿瘤细脉总肿瘤细胞百分比来表达。至少在10个光倍视野下选择染色最强的肿瘤细胞计算，由于P27阿‘在几乎三分之一病例不表达及另二分之一表达，显著减少。我们判定阳性细胞＜二邮为两河‘表达缺失，其它为表达存在。用hi－67标记指数评估肿瘤细胞增殖，由对S－P免疫染色反应阳性最深的肿瘤细胞核的区域决定，而不管 P27阿‘计数区。这些评估由不懂预后因素和临床结局的两个研究员进行(C人和S、M人 统计学分析 用卡方及 t检验，P27聊‘表达和 i－67相关关系用 Pearson’s分级，根据K－M方法汇制生存曲线，并用Cox回归检验。 结 果 正常胰腺组织 P27御‘在所有胰岛细胞核中表达，在少于二％胰腺细胞核中零星表达，在基质中的大多数淋巴细胞中表达，小叶间及小叶内的10％上皮细胞及20％主胰管上皮中度至强度表达。 相反，在上述组织中几乎没有MIB一二阳性细胞核，其中估计hi－67 LI＜0．of％。在胰岛及胰管中可见细胞增殖与 P27阿‘表达的负相关，而在腺细胞中其关系不明确，肿瘤组织中 p27“‘’‘表达水平显著下降。尽管，肿瘤组织浸润的淋巴细胞超过90％染色强阳性。但是有 10例肿瘤细胞核 P27御‘表达完全缺失，8例仅有不到1％表达，其余18例见到与正常相似的分散的P27御‘表达。5例患者中阳性细胞表达由二％－－％，7例中 5％－10％，6例患者超过10％。根据一个均值＊0将 p27御‘表达水平分为 2个亚组，18例患者肿瘤细胞阳性表达＜二动为阴性，共余18例患者为阳性。二组间表达水平差异显著0．28％fo．34％VS 8．M％16?