【摘 要】
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目的:利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能广泛应用于临床而且稳定、敏感、特异的荧光定量PCR检测解脲脲原体(UU)方法。方法:构建重组质粒pMD18-T-UU-Ure作为标准品。自行
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目的:利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能广泛应用于临床而且稳定、敏感、特异的荧光定量PCR检测解脲脲原体(UU)方法。方法:构建重组质粒pMD18-T-UU-Ure作为标准品。自行设计二聚体蝎型探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价。结果:1)成功构建了重组质粒pMD18-T-UU-Ure; 2)建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法,其线性检测范围:101-107copies/μl;灵敏度:1copies/μl;重复性试验结果为批内CV为3.50%,批间CV为3.93% ,天间CV为3.77%;特异性:100%;与Taqman探针技术定量方法比较,结果差异无统计学意义;3)初步临床应用证明:该方法比利用Taqman技术建立的方法灵敏度更高,检测时间更短和成本也明显降低。结论:在国内外首次建立了以二聚体蝎型荧光探针为平台的解脲脲原体荧光定量PCR检测方法,为新型试剂盒的开发提供了实验依据,同时也促进新型探针技术的应用。
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