【摘 要】
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在大肠杆菌磷酸转移酶系统中,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCB转运入细胞,利用Red同源重组技术敲除ptsG基因,有望降低葡萄糖的摄取速率,减少乙酸累积,促进菌体生长.运用PCR
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在大肠杆菌磷酸转移酶系统中,葡萄糖主要由ptsG基因编码的酶ⅡCB转运入细胞,利用Red同源重组技术敲除ptsG基因,有望降低葡萄糖的摄取速率,减少乙酸累积,促进菌体生长.运用PCR技术,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段.经电转化,将外源DNA片段转入Escherichia coli DH5α、JM109中.在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与染色体上对应区域重组,将基因ptsG置换,构建ptsG基因缺陷株DH5αP、JM109P.在含有葡萄糖的LB培养基摇瓶实验中,DH5αP、JM109P的最高菌密度、葡萄糖摄入量,均明显高于各自的对照菌株DH5α、JM109,并且培养液中pH值下降较慢.重组蛋白肿瘤坏死因子(TNF)在DH5αP、JM109P中的表达分别占全菌蛋白的47.1％、40.9％.以上结果说明,大肠杆菌ptsG基因缺陷株具有良好的生长能力,有望用于大肠杆菌高密度发酵研究.
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