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本文是对我室克隆到的附睾特异性表达基因Glb1l4,在已有数据的基础上,从蛋白水平对其性质和功能进行了进一步的探索和研究。大鼠Glb1l4基因位于大鼠8号染色体8q13位,约有41k个碱基组成,含有20个内含子和21个外显子。Glb1l4 cDNA全长2607个碱基(不包括polyA尾巴),编码637个氨基酸,其中包括24个信号肽。氨基酸组成上与beta-galactosidase有大约50%的同源性。为研究Glb1l4蛋白质的功能,我们选取其蛋白N端和C端两段肽段作为抗原,制备了多克隆抗体。其中抗N端抗原的抗体具有很高的特异性和灵敏度。Northernblot,Western blot以及免疫组化的结果显示大鼠Glb1l4 mRNA和蛋白在附睾头部主细胞中特异表达,并且呈雄激素依赖性的表达模式。在大鼠的发育过程中,Glb1l4 mRNA和蛋白质在附睾发育的过程中高表达,在青春期表达出现峰值,并且在附睾主细胞分化过程中,其在细胞质的分布出现极化现象,这说明GLB1L4蛋白在细胞分化时发挥了作用。在附睾发育结束后其表达水平迅速下降,维持较低的表达水平,此时蛋白开始分泌到附睾管腔中并与附睾头部的精子结合,显示其又可能参与了精子在附睾中的成熟。Glb1l4的表达模式和在大鼠发育不同时期所出现的不同场所暗示了其对大鼠附睾的发育和精子的成熟具有重要的意义。
为了研究Glb1l4在大鼠附睾发育和精子成熟中的作用,我们利用基于慢病毒载体的RNAi的方法初步建立了能长期稳定下调Glb1l4表达的大鼠模型。
为了进一步的研究该基因在整体动物上的功能,尤其是为knock-out小鼠的表型分析做好准备,我们又克隆了小鼠Glb1l4的基因,并制备了抗体,分析了小鼠Glb1l4的表达模式。小鼠Glb1l4 cDNA全长2433个碱基,编码612个氨基酸,其中含有24个氨基酸的信号肽。与大鼠的Glb1l4基因特性相似,小鼠Glb1l4 cDNA和蛋白质也呈现出附睾特异性且受雄激素正调控,区域、细胞特异性的表达模式,并且在小鼠青春期高表达,在性成熟后低表达。只是在与精子的结合模式上有其自身的特性。