禽巴氏杆菌链霉素耐药基因StrA、磺胺耐药基因Su1 Ⅱ的克隆及原核表达

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本实验利用从临床病例中分离到的禽多杀性巴氏杆菌对临床常用链霉素和磺胺类药物具有极高耐药性这一特点,开展了对链霉素耐药基因StrA和磺胺耐药基因Su1II的研究工作。利用PCR 技术,扩增出StrA、Su1II 基因片段。通过对核苷酸序列测序结果分析表明:StrA 基因序列与GenBank 中发表序列同源性为99.8%;Su1Ⅱ基因序列的同源性为98.9%,上述基因所编码的氨基酸没有改变。将StrA、Su1II 基因按正确的阅读框架定向克隆到原核表达载体pET-28c(+)中,将构建好的重组表达质粒转化到受体菌BL-21(DE3)中,经IPTG 诱导后,行SDS-PAGE 电泳,经检测,StrA、Su1II 外源基因的表达产物分别占菌体总蛋白的12%和11%,蛋白表达形式为包涵体。通过对实验中标准株和耐药株巴氏杆菌对链霉素和磺胺耐药性差异的比较,发现耐药性增强与StrA、Su1II 耐药基因突变有关。上述研究将为进一步明确由质粒介导的耐药基因突变在巴氏杆菌耐药机制形成过程中所起的作用的研究奠定理论基础。
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