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目的:类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种以关节滑膜为主要靶组织的慢性高致残性自身免疫性疾病,异常的炎症和免疫反应是RA患者的主要发病机制。细胞因子在驱动滑膜细胞活化导致关节破坏中起关键作用。最近的研究表明白细胞介素（Interleukin,IL）-34在关节炎患者的滑膜成纤维细胞和滑膜下及内膜层中均有表达,并且与滑膜炎的严重程度显著相关。显著升高的IL-34水平可能是RA活动的有效标志。但IL-34在RA中的具体作用机制尚不十分明确。T辅助（T helper cell,Th）型17细胞可分泌细胞因子IL-17。IL-17是一种促进炎症的细胞因子,可以促进关节局部炎症发生,导致大量的细胞因子释放,如肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-a）、IL-1、IL-6等,这些细胞因子在RA的炎症及骨破坏中均起一定的作用。IL-17在RA患者的滑膜组织和滑液中高度表达,其表达水平与RA关节破坏程度密切相关。IL-34是否对Th17细胞有调控?IL-34是否通过促进IL-17的分泌与表达参与RA发病?目前国内外还无相关报道。本研究通过外源性给予重组人IL-34作用于RA外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC）和成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like Synoviocytes,FLS）,观察IL-34对RA患者PBMC中不同Th细胞亚群的增殖影响;观察IL-34对FLS细胞增殖与凋亡的影响;研究IL-34对FLS分泌炎性细胞因子及血管新生相关细胞的作用,以探讨IL-34在RA发病中的作用;同时我们应用IL-17抑制剂阻断RA中IL-17的作用,观察IL-34是否通过调控IL-17的分泌影响RA的发病,为进一步研究IL-34的作用机制及治疗RA提供重要的思路。研究方法:1.收集RA患者外周血,提取PBMC,用不同浓度IL-34刺激,分别收集细胞及上清液进行检测:流式细胞术检测Th1、Th2、Th17、调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）细胞百分比;实时聚合酶链反应（Realtime polymerase chain reaction,RT-PCR）及蛋白质印记法（Western blot）检测Th1、Th2、Th17、Treg细胞转录因子T-BET、GATA-3、视磺酸受体相关孤儿受体（Retinoic acid-related orphan receptor,ROR）γt及组织中叉头样转录因子3（transcription factor forkhead box P3,Foxp3）mRNA及蛋白的表达水平;酶联免疫吸附法（Eenzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测上清液中Th1型细胞因子γ干扰素（Interferon-gamma,IFNγ）、Th2型细胞因子IL-4、Th17型细胞因子IL-17A和Treg型细胞因子IL-10的水平。2.不同浓度IL-34刺激RA患者FLS细胞,MTT法及流式细胞术检测FLS的增殖与凋亡,并进一步检测在IL-17抑制剂白花丹素（Plumbagin,PB）的作用下,IL-34对RA-FLS的增殖与凋亡作用是否出现变化。3.不同浓度IL-34刺激RA-FLS:RT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-17及血管新生因子血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、缺氧诱导因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1,HIF-1α）mRNA的表达;Western blot检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-17及血管新生因子VEGF、HIF-1α蛋白的表达;ELISA检测上清液中炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-17及血管新生因子VEGF、HIF-1α的分泌水平。4.加入IL-17的抑制剂及不同浓度IL-34刺激RA-FLS:RT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-17及血管新生因子VEGF、HIF-1αmRNA的表达;Western blot检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-17及血管新生因子VEGF、HIF-1α蛋白的表达;ELISA检测上清液中炎性因子TNF-α、IL-6、IL-17及血管新生因子VEGF、HIF-1α的分泌水平。结果:1.不同浓度的IL-34（0,25,50,100ng/ml）处理RA患者的PBMC后:（1）Th17比例明显升高,差异有统计学意义,且存在浓度依赖性。而Th1、Th2、Treg无明显变化。（2）ROR-γt、IL-17A的mRNA及蛋白水平明显升高,且存在浓度依赖性。T-bet、GATA-3、Foxp3和IL-10 mRNA及蛋白水平没有显著变化。（3）细胞上清液中IL-17A的水平明显升高,且存在浓度依赖性。而IFN-γ、IL-10的水平没有显著变化。2.不同浓度IL-34刺激FLS后:（1）MTT法检测FLS的增殖情况发现:IL-34可促进RA-FLS的增殖,且存在浓度依赖性。而IL-17的抑制剂PB能够拮抗IL-34对RA-FLS的促增殖作用。（2）流式细胞术法检测FLS的凋亡情况发现:IL-34可抑制RA-FLS的凋亡,且存在浓度依赖性。而IL-17的抑制剂PB能够拮抗IL-34对RA-FLS的抑制凋亡作用。3.不同浓度IL-34刺激FLS后:（1）炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-17的mRNA及蛋白表达均明显升高,上清液中TNF-α、IL-6、IL-17的分泌水平均明显增高,且具有浓度依赖性。而IL-17抑制剂PB可拮抗IL-34的上述作用。（2）血管新生相关细胞因子VEGF、HIF-1α的mRNA及蛋白表达均明显升高,具有浓度依赖性。细胞上清液中VEGF的分泌水平明显增高,且具有浓度依赖性。而PB可拮抗IL-34的上述作用。结论:1.IL-34促进了Th17细胞增殖和PBMC中IL-17的分泌。2.IL-34促进了RA-FLS的增殖,抑制了其凋亡。IL-17抑制剂可阻断IL-34对RA患者FLS细胞增殖和凋亡的调节作用3.IL-34可促进RA-FLS炎性因子和血管新生因子的分泌,IL-34可能通过调控IL-17影响RA-FLS的功能。4.IL-34可能成为RA患者治疗的潜在靶点。