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【目的】
⒈探讨肠道菌群外膜囊泡(outer membrane vesicels，OMVs)能否作为肠脑交流的物质。
⒉探讨婴儿肠道菌群OMVs(B-OMVs)能否改善APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆能力。
⒊探讨B-OMVs能否改善肠、脑Aβ沉积及减少炎症。
⒋探讨B-OMVs能否通过GSK-3β调节tau蛋白磷酸化。
【方法】
Aβ42诱导SH-SY5Y建立AD细胞模型，分三组，正常老人来源的肠道菌群OMVs(H-OMVs)、PBS、B-OMVs分别处理细胞24小时。通过CCK8、流式细胞仪检测AD细胞模型凋亡和增殖情况，WesternBlot(WB)检测AD细胞模型tau蛋白磷酸化表达。
7月龄雄性AD小鼠随机分为H-OMVs组、PBS组、B-OMVs组，每天分别灌胃H-OMVs、PBS、B-OMVs，8周后，通过新物体识别(Novel Object Recognition， NOR)实验、Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力；肠运动实验检测肠动力功能及肠道炎症情况；伊文思蓝染料检测血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)通透性及苏木素-伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色观察脑组织形态及外周炎症细胞浸润情况；免疫荧光检测回肠和脑组织GFAP、Aβ42的表达；免疫组化检测脑组织Iba1、APP的表达；WB检测脑组织GSK-3β、pGSK-3β、ptau-396的表达。
液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测B-OMVs、H-OMVs，分析差异性物质。
【结果】
⒈肠道菌群OMVs携带大量的肠道细菌代谢产物，而且能穿过肠屏障和血脑屏障进入大脑。B-OMVs和H-OMVs有65种明显差异的代谢物。
⒉在小鼠学习记忆能力评估实验中，NOR实验显示，与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组小鼠对新物体分辨比(Discrimination ratio，DR)和分辨指数(Discrimination index，DI)值更大(P＜0.05)。Morris水迷宫的定位航行实验显示，与PBS组比，B-OMVs组AD小鼠在第三天和第五天的逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01)，H-OMVs组小鼠在第三天的逃避潜伏期明显延长(P＜0.01)。在空间探索实验中，与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组小鼠穿越平台的次数、停留在目的象限的时间和游泳路程占百分比都增加(P＜0.05)。
⒊OMVs对肠道影响的实验中，与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组AD小鼠墨水排空较明显，回肠Aβ42、GFAP表达明显减少(P＜0.05)。
⒋OMVs对小鼠大脑血脑屏障及形态学的影响：PBS组、H-OMVs组、B-OMVs组伊文斯蓝含量差异无统计学意义；三组小鼠脑组织大体形态结构及外周炎症细胞浸润无明显差异。与PBS组相比，H-OMVs组海马GFAP表达减少(P＜0.05)，Aβ42表达未见明显差异(P＞0.05)，而B-OMVs组中Aβ42、GFAP表达均减少(P＜0.05)；与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组海马区的Iba1、APP表达呈减少趋势。
⒌OMVs对细胞保护及对GSK-3β、tau蛋白磷酸化的影响：与PBS处理组相比，B-OMVs处理组AD细胞模型ptau-396表达减少(P＜0.05)，细胞凋亡减少，细胞增殖增多(P＜0.05)。与PBS处理组相比，B-OMVs组脑组织GSK-3β、ptau-396表达减少(P＜0.05)。B-OMVs处理组和H-OMVs处理组之间差异无统计学意义。
【结论】
⒈OMVs能作为肠脑交流的物质。
⒉B-OMVs能改善AD小鼠的学习记忆能力。
⒊B-OMVs能改善肠、脑Aβ沉积及减少炎症。
⒋B-OMVs能通过GSK-3β调节tau蛋白磷酸化。
⒈探讨肠道菌群外膜囊泡(outer membrane vesicels，OMVs)能否作为肠脑交流的物质。
⒉探讨婴儿肠道菌群OMVs(B-OMVs)能否改善APP/PS1双转基因AD小鼠学习记忆能力。
⒊探讨B-OMVs能否改善肠、脑Aβ沉积及减少炎症。
⒋探讨B-OMVs能否通过GSK-3β调节tau蛋白磷酸化。
【方法】
Aβ42诱导SH-SY5Y建立AD细胞模型，分三组，正常老人来源的肠道菌群OMVs(H-OMVs)、PBS、B-OMVs分别处理细胞24小时。通过CCK8、流式细胞仪检测AD细胞模型凋亡和增殖情况，WesternBlot(WB)检测AD细胞模型tau蛋白磷酸化表达。
7月龄雄性AD小鼠随机分为H-OMVs组、PBS组、B-OMVs组，每天分别灌胃H-OMVs、PBS、B-OMVs，8周后，通过新物体识别(Novel Object Recognition， NOR)实验、Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力；肠运动实验检测肠动力功能及肠道炎症情况；伊文思蓝染料检测血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)通透性及苏木素-伊红(hematoxylin and eosin，HE)染色观察脑组织形态及外周炎症细胞浸润情况；免疫荧光检测回肠和脑组织GFAP、Aβ42的表达；免疫组化检测脑组织Iba1、APP的表达；WB检测脑组织GSK-3β、pGSK-3β、ptau-396的表达。
液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测B-OMVs、H-OMVs，分析差异性物质。
【结果】
⒈肠道菌群OMVs携带大量的肠道细菌代谢产物，而且能穿过肠屏障和血脑屏障进入大脑。B-OMVs和H-OMVs有65种明显差异的代谢物。
⒉在小鼠学习记忆能力评估实验中，NOR实验显示，与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组小鼠对新物体分辨比(Discrimination ratio，DR)和分辨指数(Discrimination index，DI)值更大(P＜0.05)。Morris水迷宫的定位航行实验显示，与PBS组比，B-OMVs组AD小鼠在第三天和第五天的逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01)，H-OMVs组小鼠在第三天的逃避潜伏期明显延长(P＜0.01)。在空间探索实验中，与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组小鼠穿越平台的次数、停留在目的象限的时间和游泳路程占百分比都增加(P＜0.05)。
⒊OMVs对肠道影响的实验中，与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组AD小鼠墨水排空较明显，回肠Aβ42、GFAP表达明显减少(P＜0.05)。
⒋OMVs对小鼠大脑血脑屏障及形态学的影响：PBS组、H-OMVs组、B-OMVs组伊文斯蓝含量差异无统计学意义；三组小鼠脑组织大体形态结构及外周炎症细胞浸润无明显差异。与PBS组相比，H-OMVs组海马GFAP表达减少(P＜0.05)，Aβ42表达未见明显差异(P＞0.05)，而B-OMVs组中Aβ42、GFAP表达均减少(P＜0.05)；与PBS组、H-OMVs组比，B-OMVs组海马区的Iba1、APP表达呈减少趋势。
⒌OMVs对细胞保护及对GSK-3β、tau蛋白磷酸化的影响：与PBS处理组相比，B-OMVs处理组AD细胞模型ptau-396表达减少(P＜0.05)，细胞凋亡减少，细胞增殖增多(P＜0.05)。与PBS处理组相比，B-OMVs组脑组织GSK-3β、ptau-396表达减少(P＜0.05)。B-OMVs处理组和H-OMVs处理组之间差异无统计学意义。
【结论】
⒈OMVs能作为肠脑交流的物质。
⒉B-OMVs能改善AD小鼠的学习记忆能力。
⒊B-OMVs能改善肠、脑Aβ沉积及减少炎症。
⒋B-OMVs能通过GSK-3β调节tau蛋白磷酸化。