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目的:体外应用石见穿多糖作用于人胃癌细胞系MGC-803细胞,观察其对细胞迁移的影响。探讨体外石见穿多糖是否能够抑制胃癌细胞系MGC-803细胞的迁移,以及应用石见穿多糖对胃癌细胞系MGC-803细胞内白介素8(interleukin-8,IL-8)蛋白表达水平的影响,为临床上对于胃癌的治疗提供一定的理论依据。方法:1利用水萃取法制备石见穿提取物,以改良的苯酚-硫酸法测定石见穿多糖含量达75.73%(以葡萄糖计),最终配制成含石见穿多糖浓度为100mg mL-1的溶液。体外培养人胃癌细胞系MGC-803细胞。将人胃癌MGC-803细胞置于37℃、5%CO2的培养箱,用含10%胎牛血清以及青、链霉素各100U mL-1的RPMI1640培养液培养。倒置显微镜下观察细胞生长情况,0.25%胰蛋白酶消化传代,取对数生长期细胞用于实验。2(1)采用四唑盐比色(MTT)方法,观察石见穿多糖作用的人胃癌细胞增殖活性的影响,本实验重复3次。(2)划痕实验及Transwell实验通过划痕愈合率和穿膜细胞数来观察不同浓度石见穿多糖对同样条件培养下胃癌细胞系MGC-803细胞迁移能力的影响,本实验重复3次。(3)采用Western blot方法检测不同浓度石见穿多糖对MGC-803细胞内白介素8(IL-8)蛋白表达水平的影响,本实验重复3次。3统计学分析:所有数据资料以均数±标准差(x±S)表示。采用SPSS17.0统计软件统计处理,总体采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1石见穿多糖作用的人胃癌细胞增殖活性的影响。25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml浓度的石见穿多糖分别处理24h、48h和72h后,与对照组比较,人胃癌细胞的生长受到明显的抑制,25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml的石见穿多糖在作用人胃癌细胞24h后,各组的抑制率分别为13.15±1.40%、20.24±1.8%、28.86±3.01%;作用48h后,各组的抑制率分别为19.26±2.61%、30.19±2.89%、63.21±6.39%;作用72h后,各组的抑制率分别为32.11±2.06%、47.00±5.77%、82.23±7.52%,且呈现时间依赖性和剂量依赖性。经过统计学分析,各组之间差异具有统计学意义(P <0.05)。2划痕试验相同条件培养24h后,未经石见穿多糖处理的胃癌细胞系MGC-803细胞运动迁移基本完全覆盖了划痕区域。然而,加入石见穿多糖以后,MGC-803细胞的迁移能力明显减弱,细胞间划痕的距离缩短趋势减缓。并且随石见穿多糖浓度的升高,迁移到划痕区域的细胞逐渐减少,划痕距离增宽石见穿多糖浓度越高,表明MGC-803细胞的迁移受阻越明显。当石见穿多糖浓度为50g L-1时MGC-803细胞覆盖面积为(占原有划痕面积百分比):72.3±5.1%;当石见穿多糖浓度为100g L-1时,MGC-803细胞覆盖区域面积(占原有划痕面积百分比)为55.7±4.3%,且不同浓度组间差别均具有统计学意义(p﹤0.05)提示石见穿多糖抑制MGC-803细胞的迁移,且随药物浓度加大抑制作用逐渐加强。3Transwell试验相较于未进行药物处理的MGC-803细胞,经50g L-1和100g L-1石见穿多糖处理后,肿瘤细胞穿透Transwell小室孔膜的能力明显下降,各个浓度组的穿膜细胞数随药物浓度的增加而明显减少。24小时,对照组、50g L-1处理组、100g L-1处理组的穿膜细胞数分别是:136+11.8;61+7.4(p<0.05);32+8.1(p<0.05)。24小时,50g L-1处理组、100g L-1处理组的穿膜细胞的数量分别减少到对照组的穿膜细胞数的59.5±4.7和20%±3.1。4Western-blot经石见穿多糖处理过的MGC-803细胞中IL-8表达水平较对照组明显降低,其蛋白表达总量随着石见穿多糖浓度的增加而减少。空白对照组、低浓度(50g L-1)处理组、高浓度(100g L-1)处理组的IL-8蛋白条带相对灰度分别为:0.988±0.016、0.687±0.049、0.405±0.029。而β-actin蛋白表达水平在各组间无明显差异。不同浓度组之间差别具有统计学意义(P<0.05);低浓度处理组、高浓度处理组与空白对照组相比,IL-8蛋白的表达均受到抑制,且差别均有统计学意义(P<0.05),说明石见穿多糖能降低MGC-803细胞IL-8蛋白的表达;高浓度和低浓度处理组之间相比对显示高浓度组对MGC-803细胞中IL-8蛋白表达的抑制作用更明显,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:1石见穿多糖对人胃癌细胞系MGC-803细胞体外的增殖、迁移具有抑制作用。随着药物浓度的升高,对细胞迁移能力的抑制作用加强。2应用石见穿多糖可抑制人胃癌细胞系MGC-803细胞IL-8蛋白的表达。且随药物浓度升高,抑制作用加强。3石见穿多糖可能通过抑制人胃癌细胞系MGC-803细胞内IL-8的表达来实现对细胞体外迁移能力的抑制。