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1.研究背景和目的低氧诱导因子-1(HIF-1)是在缺氧环境下促进肿瘤细胞生长的一个核心调控因子,凋亡抑制蛋白家族成员之一的存活素(survivin)具有抗凋亡和调节细胞周期的双重作用,这两个因子与胰腺癌增殖和转移密切相关。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长度在21-25nt的小片段单链RNA,它可以与特定的信使RNA (messenger RNA,mRNA)互补结合,并通过沉默复合物的作用导致mRNA断裂降解,从而阻断特定基因的表达。本实验分别设计和构建HIF-1α单基因沉默、Survivin单基因沉默以及HIF-1α和Survivin双基因共沉默miRNA表达载体,并观察和比较3种载体对胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响。2.方法分别设计4条靶向HIF-1α基因和Survivn基因的miRNA,合成对应寡核苷酸序列,连接至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒,构建两组共8个miRNA真核表达载体。通过实时定量RT-PCR检测miRNA表达载体对其靶基因mRNA下调作用,并将两组中作用最强的载体进行串联,构建HIF-1α和Survivin双基因共沉默miRNA表达载体。分别以单基因沉默载体和双基因共沉默载体转染胰腺癌Panc-1细胞,MTT法检测其对Panc-1细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测转染细胞凋亡状态。3.结果经测序鉴定,单基因沉默和双基因共沉默载体装载序列与设计序列相同。HIF-1α单基因沉默载体的靶基因沉默效率分别为：48%、2%、44%和30%；Survivin单基因沉默载体的靶基因沉默效率分别为：72%、75%、58%和59%；HIF-1α和Survivn双基因共沉默载体的基因沉默效率为53%(HIF-1α)和42%(Survivn)。双基因共沉默载体对Panc-1细胞的增殖抑制作用较单基因沉默载体强,转染72小时后差异有统计学意义(P<0.05)。转染48小时后共沉默载体转染细胞的凋亡率为(20.90±1.81)%,高于单基因沉默载体(HIF-1α基因沉默载体：16.68±2.32%和Survivn基因沉默载体：15.64±3.14%)(P<0.05)。4.结论HIF-1α、Survivn单基因沉默miRNA表达载体和双基因共沉默miRNA表达载体构建成功；HIF-1α和Survivn双基因共沉默载体抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖和诱导凋亡的作用强于HIF-1α单基因沉默载体和Survivin单基因沉默载体。