由于天然产物蕴含着巨大的分子多样性，有可能发现与现有化合物作用机理完全不同的新的先导化合物母体。中草药作为一种天然产物体系，在我国已经有几千年的应用历史，在其使用方面积累了许多宝贵的经验，而且已有一些全新结构的先导化合物来自于中草药，可能将有更多的新化合物从中草药资源这个巨大的宝库中得到。但是由于天然产物体系存在化合物结构类型多样、含量差别大、同类型化合物扎堆等现象，对传统的筛选技术提出了很高的挑战。传统的活性追踪下的分离提取技术由于筛选速度慢、易漏筛低含量活性化合物，已不适应对天然产物体系快速开发的要求。本论文研究目的是建立新的高通量筛选方法以加速对中药体系开发利用。本文以丙型肝炎丝氨酸蛋白酶为靶酶，首先建立了酶联免疫测定(ELISA)的筛选法，并将该法用于中草药粗提物以及小分子的抗蛋白酶活性的筛选，然后基于亲和色谱技术发展了固定化酶和多克隆抗体的高通量亲和筛选方法，并在丙型肝炎丝氨酸蛋白酶体系和SARS-CoV的S2蛋白体系等应用实际中得到验证；另外基于活性筛选的结果对高山辣根菜进行了化学成分研究，试图得到其抗丙型肝炎丝氨酸蛋白酶的活性化合物。 本文共分五章，各章主要内容如下： 第一章绪论：综述了立题思想，亲和前沿色谱，多克隆抗体技术和抗丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶抑制剂研究状况。 第二章ELISA方法的建立及抗HCVNS丝氨酸蛋白酶活性化合物的筛选：在本实验室建立了改良的抗丙型肝炎丝氨酸蛋白酶活性的酶联免疫测定(ELISA)方法，可以大大节约多肽底物的用量。这项工作也为实验室的抗丙型肝炎活性化合物的研究建立了活性测定的平台。用该方法对221种药材粗提物进行了活抗丝氨酸蛋白酶的活性测定，筛选出28种药材粗提物有体外抗丙型肝炎丝氨酸蛋白酶活性。另外研究了一系列小分子化合物的抗丙型肝炎丝氨酸蛋白酶活性。结果表明鞣质类多酚化合物具有较好的抗丙型肝炎丝氨酸蛋白酶活性，其最高活性IC50值为0.66μM，它们的活性与没食子酸取代的数量有关，而所测定的其它几类化合物则没有表现较好的活性。 第三章亲和前沿色谱质谱联用法筛选中药中的抗丙型肝炎活性化合物：首先介绍了固定化酶亲合柱和多克隆抗体亲合柱的方法直接用于识别药材狭叶红景天正丁醇部分的抗HCVNS3丝氨酸蛋白酶活性化合物的前沿色谱实验和结果。通过与蛋白酶直接测活结果相比较，各化合物在两种亲和柱上均能够按照它们的活性展开，从而实现了利用固定化酶亲和柱和多克隆抗体柱对天然产物的混合物进行活性筛选的目的。由于这两种方法对活性化合物具有相同的保留顺序，因此可以互相补充用于抑制剂的筛选。本论文首次将固定化酶亲和前沿色谱方法用于中药体系中活性化合物的筛选。 第四章阻断SARS侵入细胞的抑制剂的筛选：本章首先综述SARS-CoV及其药物研究现状。在实验部分，介绍了以SARS-CoV的S2蛋白为亲合固定相，首先采用亲合色谱质谱联用法对大量药材粗提物或化合物进行筛选，在短时间内即发现了2个能够与SARS的S2蛋白结合从而能抑制病毒感染细胞的抑制剂，分别为五倍子中TGG和索罗玛保中的木樨草素，他们抗野生型SARS感染的EC50分别为4.5、和10.6μM，而且TGG具有高的选择性指数，为240.0。槲皮素有由于与木樨草素具有非常类似的结构，也有较好的活性，其抗假病毒活性为83.4μM。这些结果也从另一个方面说明固定化蛋白的亲和前沿色谱法用于识别中药体系中的活性化合物是可行的。 第五章传统方法研究藏药高山辣根菜化学成分：利用传统的植物化学方法，首次对在活性筛选中发现具有一定活性的藏药高山辣根菜的化学成分进行了研究，分离鉴定了10个化合物。其中三个呋喃型木质素类化合物为首次从该属植物中分离等到。