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目的:急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的常见并发症,aGVHD主要由T细胞介导。rhG-CSF是异基因外周血造血干/祖细胞(PBPCs)动员最常用的细胞因子。最近国内外大量临床事实表明rhG-CSF动员可诱导外周血T细胞免疫耐受, rhG-CSF作为T细胞免疫耐受调节剂已得到国内外许多学者的认可。rhGM-CSF也是一种常用的干细胞动员剂,但因其副作用大、动员效果差已被G-CSF所取代,也有研究表明rhG-CSF联合rhGM-CSF动员可得到很好的动员效果,尤其是在一些单用rhG-CSF动员失败的患者。rhGM-CSF对GVHD的影响各家报道不一,有报道认为单用rhGM-CSF动员与单用rhG-CSF动员或联合应用rhGM-CSF和rhG-CSF动员相比可使aGVHD发生率明显减低;也有研究表明联合应用rhGM-CSF和rhG-CSF动员与单用rhG-CSF动员或单用rhGM-CSF动员相比可减少GVHD的发生率。本研究的目的是探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)及重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)单独或联合应用对小鼠脾脏T淋巴细胞、树突状细胞数量和功能的影响及其机制。方法:将近交系的BALB/C小鼠随机分四组如下:rhG-CSF组:rhG-CSF 250μg·kg- 1·d- 1皮下注射,1～5天;rhGM-CSF组:rhGM-CSF 250μg·kg- 1·d- 1皮下注射,1～5天;联合组: rhG-CSF、rhGM-CSF各250μg·kg- 1·d- 1皮下注射,1～5天;对照组:等量生理盐水皮下注射,1～5天。最后一次注射完后24小时将小鼠的脾脏制成单个核细胞悬液,应用MTT法检测各组T淋巴细胞的增殖能力;应用流式细胞仪对细胞因子处理后的各组T淋巴细胞和亚群、共刺激分子CD28、抑制性T淋巴细胞(CD8+ CD28-、CD4+ CD25+)以及树突状细胞DC1(CD11c+)、DC2(CD11c-)的数量进行测定;应用半定量RT-PCR测定细胞内IL-4mRNA、IFN-γmRNA的表达情况。结果:1细胞因子处理后T淋巴细胞增殖能力的变化经rhG-CSF、rhGM-CSF单独或联合应用后T淋巴细胞增殖能力均下降(P<0.05),下降的程度rhGM-CSF组较rhG- CSF组、联合组更明显(P<0.01),rhG-CSF组与联合组比较无明显差异(P>0.05)。2细胞因子处理后淋巴细胞数量及T细胞亚群的变化rhG-CSF组、rhGM-CSF组及联合组淋巴细胞和T细胞亚群与对照组比较均有下降(P<0.05),其中rhGM-CSF组CD3+、CD4+细胞下降更明显(P<0.05),rhGM-CSF组和联合组CD8+细胞下降较明显(P<0.05),但两组之间比较无显著性差异(P>0.05);CD4+/CD8+细胞的比值rhGM-CSF组明显低于其它各组(P<0.05)。3细胞因子处理后共刺激分子CD28的变化rhG-CSF组、rhGM-CSF组及联合组CD3+CD28+细胞与对照组比较均下降(P<0.05),其中rhGM-CSF组CD3+CD28+细胞下降更明显(P<0.05),rhG-CSF组、rhGM-CSF组及联合组CD4+CD28+、CD8+CD28+细胞均较对照组有所下降,但各组间差异无统计学意义(P>0.05)。4细胞因子处理后抑制性T淋巴细胞的变化抑制性T淋巴细胞CD4+CD25+在rhG-CSF组、rhGM-CSF组及联合组均较对照组增加,且有统计学意义(P<0.05), rhGM-CSF组增加最显著(P<0.05);CD8+CD28-细胞占有核细胞的数量在rhG-CSF组、rhGM-CSF组及联合组较对照组均增加(P<0.05),其中以rhGM-CSF组上升最显著(P<0.05)。5细胞因子处理后树突状细胞的变化rhG-CSF组、rhGM-CSF组、联合组与对照组相比显著增加了DC2的含量(P<0.05),联合组DC2的含量明显少于rhG-CSF组和rhGM-CSF组,DC1的含量各组无变化(P>0.05), rhG-CSF组、rhGM-CSF组、联合组DC1/DC2比值与对照组相比显著下降(P<0.05),其中rhGM-CSF组下降最明显(P<0.05)。6细胞因子处理后IL-4mRNA和INF-γmRNA表达的变化rhG-CSF组、rhGM-CSF组、联合组与对照组比较IL-4mRNA表达水平均升高(P<0.05),其中rhGM-CSF组升高较rhG-CSF组和联合组更明显(P<0.05),联合组升高较rhG-CSF组显著(P<0.05) ; rhG-CSF组与对照组比较INF-γmRNA表达水平下降(P<0.05), rhGM-CSF组与对照组比较INF-γmRNA表达水平升高(P<0.05),联合组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05) ;但INF-γmRNA/IL-4mRNA比值rhG-CSF组、rhGM-CSF组、联合组与对照组比较均下降(P<0.05), rhGM-CSF组及联合组下降较rhG-CSF组更明显(P<0.05), rhGM-CSF组及联合组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:1 rhG-CSF作为动员剂可诱导外周血T细胞免疫耐受,可减轻异基因造血干细胞细胞移植后aGVHD的发生率。2 rhGM-CSF作为动员剂在体内诱导异基因造血干细胞移植供者外周血T细胞免疫耐受,可减轻急性GVHD的发生率。3 rhGM-CSF、rhG-CSF作为造血干细胞细胞移植动员剂均能够诱导T淋巴细胞免疫耐受,两者联用后协同作用并不理想,rhGM-CSF也许会更有利于GVHD和移植物抗白血病效应(GVL)的部分分离甚至完全分离。