放线菌活性次级代谢产物发现和青藤碱皮肤创面愈合作用研究

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本文第一部分对来源于江西省高安市的土壤样品中分离得到的20株放线菌进行了研究,经小量发酵后,应用TLC及HPLC方法进行了化学筛选,选取其中1株代谢产物丰富的菌株进行大量发酵,对发酵后的次级代谢产物进行了化学成分研究。放线菌的次级代谢产物采用各种色谱方法,包括大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、ODS开放柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和半制备HPLC,对放线菌的发酵液和菌丝体进行了化学成分的分离,分离得到11个化合物,根据理化性质和波谱数据鉴定了6个化合物的结构,分别为吡咯并哌嗪-2,5-二酮(1)、尿嘧啶脱氧核苷(2)、腺嘌呤核苷(3)、尿嘧啶(4)、苯丙氨酸(5)、L-色氨酸(6),其中化合物1为种内首次分离化合物。本文第二部分研究了青藤碱对皮肤创面愈合的作用。皮肤作为人体的第一道防线,各种原因导致的皮肤急慢性损伤是常见的疾患之一。本文以从青风藤中分离得到的青藤碱(sinomenine,SIN)为研究对象,建立体外人角质形成细胞(Ha Ca T)模型和体外小鼠皮肤急性创伤模型来检测青藤碱对皮肤创面愈合的影响,通过CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移能力,Transwell检测细胞的迁移能力,细胞流式法检测细胞周期及q RT-PCR和免疫印迹蛋白检测细胞周期相关基因和蛋白的相对表达量,HE染色和免疫组织化学染色检验炎性因子在组织中的表达。CCK-8结果显示1、10和15μM的SIN处理24 h后抑制Ha Ca T细胞的增殖,无血清培养时,1和15μM的SIN处理24 h后抑制Ha Ca T细胞的增殖,对其他两种细胞的细胞增殖无影响。划痕实验结果显示5μM的SIN促进Ha Ca T细胞划痕的愈合。Transwell结果显示SIN对细胞的迁移能力无影响。HE染色和免疫组织化学染色,结果显示SIN对小鼠皮肤愈合没有抑制作用,推测SIN对皮肤的安全性较好。
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