二化螟Chilo suppressalis(Walker)是我国乃至世界范围内为害最严重的水稻害虫之一。转Bt基因抗虫水稻的研发成功地减少了化学农药的使用,研究其杀虫机理和靶标害虫对它的抗性机理非常有必要。基于此,本研究开展了二化螟中肠的假想受体碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)基因家族的克隆、序列分析、Cry蛋白与假定受体基因的结合特性及其受体功能的研究,主要结果如下:1.通过对二化螟中肠转录组数据库筛选整理并结合二化螟基因组数据库(http://ento.njau.edu.cn/ChiloDB/)的补充验证以保证ALP家族基因的完整克隆,采用RACE技术克隆共获得二化螟6个ALP基因家族成员的cDNA全长序列,其中3个基因已为GenBank收录:CsALP1、CsALP2、CsALP3,3个为新克隆基因:Cs ALP4、CsALP5、CsALP6,对这3个基因进行序列分析表明,编码蛋白质分子量分别为56.79、55.68和59.77 kD,具有N-、O-糖基位点,具有和Cry蛋白结合相关的GPI锚定位点。2.假想受体基因与Cry蛋白的结合特性分析:利用大肠杆菌系统体外表达二化螟ALP基因家族各等位基因,通过Ni2+柱纯化获得重组受体蛋白的纯蛋白,经过脱盐透析并用Bradford法进行蛋白定量,用Cry蛋白(Cry1Ac、Cry2Aa和Cry1Ca)分别与各表达蛋白开展点杂交实验,初步验证了各CsALPs多肽可以与三种Cry蛋白结合。3.合成假定受体基因的dsRNA,用喂食法进行RNA干扰。利用定量PCR技术检测喂食dsRNA 24小时后靶标基因mRNA表达量变化,CsALP1、CsALP2、CsALP3、CsALP4和CsALP5基因表达量明显下调;而Cs ALP6基因表达量下降不显著。基因功能分析表明,CsALP1、CsALP2和CsALP4为Cry1Ac、Cry2Aa和Cry1Ca的功能受体;CsALP3为Cry1Ac和Cry1Ca的功能受体;CsALP5和CsALP6为Cry1Ca的功能受体,说明ALP家族不同成员具有Cry蛋白作用的特异性。