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为了研究磷脂酰胆碱(PC)在原核生物细胞膜中的生物学作用,探讨PC对细菌膜系统功能的影响,特别是PC的引入对原核生物细胞胞壁相关蛋白以及细胞外蛋白的表达和运输的影响,以大肠杆菌(Escherichia coli)Top10为研究对象,使用ptac85表达质粒作为载体,将螺旋菌(Borrelia burgdorferi)pcs基因导入E.coli Top10细胞中,构建了E.coli Top10 pcs+菌株。该菌株在添加有胆碱的培养基中培养,经IPTG在37℃条件诱导4-8小时,能大量合成PC。以含有ptac85质粒的野生型大肠杆菌做对照,同时提取两种细菌的外膜蛋白,周质蛋白和细胞外蛋白,并利用二维电泳的方法分离蛋白质。根据它们的电泳图谱,比对并寻找差异蛋白质。然后将明显差异的蛋白进行胰蛋白酶消化,再利用MALDI-TOF质谱技术分析比较。通过MASCOT程序搜寻鉴定,结果发现,在外膜蛋白的二维电泳凝胶上有三种蛋白差异明显,分别是OmpW,Pal和Dps。其中,菌株E.coli Top10 pcs+的外膜蛋白OmpW和细胞质蛋白Dps的表达量较野生型明显下降,OmpW的表达量从6.2％降至1.6％,减少约3倍,而Dps四个蛋白质点含量从14.67％降至1.29％,总共减少约10倍；另一种外膜脂蛋白Pal则相反,其表达量从1.5％增加到3.1％,上升了2倍。周质蛋白的二维电泳结果仅有2-3个蛋白点有区别,但这些蛋白点含量变化小于2倍。而胞外蛋白的二维电泳结果表明,E.coli细胞膜中掺入PC之后,其细胞外蛋白的种类较野生型明显减少,但这些蛋白在凝胶上多呈现低丰度。此外,利用Western blotting的方法,使用两种细菌的免疫血清,分别对外膜蛋白、周质蛋白和细胞外蛋白进行杂交。结果发现,外膜蛋白、细胞外蛋白分别与Top10/ptac85和Top10 pcs+细菌免疫兔子后所得的血清多抗杂交时,差异不明显；而用周质蛋白杂交时,同种血清没有明显的差异,不同血清之间则差异明显。二维电泳分析和Western blotting杂交的实验结果表明,虽然PC的掺入只是改变了E.coli Top10细胞膜上磷脂的组成,但是却对细菌的胞壁相关蛋白和细胞外蛋白的表达、转运和分泌产生了影响,同时也改变了细菌的抗原性。这些信息可以帮助我们更好的了解PC在原核生物细胞中的功能,同时为PC与细菌致病性的关联提供理论依据和支持。