【摘 要】
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背景和目的:我们在一例初发急性单核细胞白血病患者骨髓样本中首次发现了罕见染色体异常t（X;17）（q28;q21）,该患者接受化疗后在一年内复发死亡。鉴于白血病相关易位对诊断,预后,生物学甚至治疗的重要影响,对t（X;17）（q28;q21）累及的融合基因进行鉴定并研究其在白血病发病过程中的作用十分重要。方法:我们应用RNA-seq结合PCR和Sanger sequencing方法鉴定t（X;17
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背景和目的:我们在一例初发急性单核细胞白血病患者骨髓样本中首次发现了罕见染色体异常t（X;17）（q28;q21）,该患者接受化疗后在一年内复发死亡。鉴于白血病相关易位对诊断,预后,生物学甚至治疗的重要影响,对t（X;17）（q28;q21）累及的融合基因进行鉴定并研究其在白血病发病过程中的作用十分重要。方法:我们应用RNA-seq结合PCR和Sanger sequencing方法鉴定t（X;17）（q28;q21）相关融合基因,并应用qRT-PCR方法检测受累基因（KANSL1、MTCP1、CMC4）在各种类型的白血病细胞株和不同亚型白血病患者骨髓中的表达情况。构建免疫荧光标记的融合基因质粒,转入NIH3T3细胞株,观察其亚细胞定位以及其与受累基因野生型蛋白之间的共定位情况。建立一系列受累基因异常表达的小鼠髓系祖细胞32D稳转细胞株,用细胞计数和流式细胞术检测对增殖和分化的影响;用集落形成法和连续接种法检测受累基因异常表达对小鼠骨髓lineage阴性细胞克隆性增殖能力的影响。最后,构建骨髓移植小鼠模型以鉴定融合基因导致的受累基因表达异常致白血病的能力。结果:通过RNA-seq测序发现该易位患者中位于染色体17q21位置的KANSL1基因5’-UTR区与位于染色体Xq28位置的MTCP1/CMC4基因CDS区发生融合,并通过PCR和Sanger sequencing的方法在患者初发骨髓样本中验证该KANSL1-MTCP1/CMC4融合基因存在4种不同转录本。融合基因结构分析提示KANSL1-MTCP1/CMC4融合基因不产生KANSL1-MTCP1/CMC4融合蛋白,但qRT-PCR显示该融合导致该患者KANSL1基因表达下调以及MTCP1和CMC4基因表达上调。免疫荧光显示KANSL1-MTCP1/CMC4融合基因表达并不改变MTCP1和CMC4蛋白定位。分别构建MTCP1和CMC4基因高表达的32D稳转细胞株（以下称MTCP1-32D和CMC4-32D）,并在MTCP1-32D中用sh RNA敲低KANSL1基因的表达以模拟KANSL1-MTCP1融合基因产生的表达改变效果（以下称MTCP1-sh KANSL1-32D）,以转入Vector的32D细胞作为对照组（以下称Vector-32D）。细胞计数显示MTCP1-32D和MTCP1-sh KANSL1-32D均可见明显的细胞增殖优势,而CMC4-32D不具备这种促进增殖的能力。流式细胞术检测显示MTCP1-32D和MTCP1-sh KANSL1-32D出现G-CSF诱导的细胞分化抑制,而CMC4-32D不具备这种抑制分化的特点。集落形成法和连续接种实验结果显示MTCP1-32D和MTCP1-sh KANSL1-32D具有克隆性增殖且传代增殖的能力;与之相比较,随着接种代数增多,CMC4-32D则逐渐丧失增殖能力。同样的克隆性增殖的能力在异常高表达MTCP1基因以及同时高表达MTCP1基因并敲低KANSL1基因表达（即MTCP1-sh KANSL1）的小鼠骨髓lineage阴性细胞中也得到验证。异常表达MTCP1和CMC4基因的骨髓移植小鼠并未出现明显的白血病表型。结论:我们的研究鉴定出了在一例急性单核细胞白血病患者中发现的罕见t（X;17）（q28;q21）染色体易位导致的新融合基因KANSL1-MTCP1/CMC4,证明这个融合基因的主要生物学效应在于导致MTCP1基因的异常表达以及伴随的KANSL1基因表达下调。融合基因导致的这两个基因表达改变能引起32D细胞分化抑制及增强其克隆性增殖的能力,参与白血病的发生机制。
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