论文部分内容阅读
第一部分miR-424在胎儿生长受限组和正常对照组胎盘组织中差异表达研究目的本研究分析胎儿生长受限组（FGR）和正常对照组胎盘组织中miR-424的表达水平，探讨miR-424与FGR的相关性，从而阐明miR-424在FGR中的作用，为胎儿生长受限发病机制提供新的思路和途径,为胎儿生长早期诊断分子指标的筛选奠定基础。方法选取25例胎儿生长受限组(实验组)和25例正常对照组胎盘组织，Trizol一步法提取组织中总RNA,鉴定总RNA的质量，Real Time-PCR分别测定胎儿生长受限胎盘和正常对照组胎盘组织中miR-424的表达水平与内参基因U6表达的相对值，分析miR-424和胎儿生长受限的相关性。结果①FGR组产妇年龄和孕前体重及孕周与正常对照组无显著性(P>0.05)，FGR组新生儿体重明显低于对照组(P<0.001)；②应用RT-PCR方法分别检测了胎儿生长受限组和正常对照组胎盘组织中miR-424的表达水平，与正常对照组胎盘组织比较，表达明显增加。((p=0.002)；③miR-424可以作为一个潜在的生物学标志物来区分FGR及正常对照组，其AUC为0.754，灵敏度为88.6%，特异性为68.0%。结论miR-424在胎盘滋养细胞上表达丰富，高表达水平是实现miRNA-424生物学功能的基础。生物学功能包括调控细胞的分化，增殖及血管生成。在胎儿生长受限组胎盘组织中表达水平明显升高的miR-424可能参与了胎儿生长受限的病理生理的发生和发展。第二部分miR-424的靶基因MEK1和FGFR1在胎儿生长受限中胎盘组织中差异表达研究目的探讨miR-424的靶基因MEK1和FGFR1在胎儿生长受限中的差异性表达，探讨靶基因丝裂原活化蛋白激酶激酶1（MEK1）和成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）与FGR的相关性，从而阐明在FGR中的作用，为胎儿生长受限发病机制提供新的思路和途径。方法采用Real Time-PCR测定25例胎儿生长受限患者胎盘组织中靶基因MEK1和FGFR1mRNA的表达水平基因与内参基因GAPDH mRNA表达的相对值，与25例正常胎盘组织中表达水平相比较。western blotting方法检测miR-424的靶基因MEK1和FGFR1在5例胎儿生长受限及正常对照胎盘组织中表达水平，蛋白分析GAPDH作为阴性对照。结果①与正常胎盘组织比较，miR-424靶基因MEK1和FGFR1mRNA水平明显降低（P=0.036）。②western blotting方法检测miR-424靶基因MEK1和FGFR1蛋白，与正常胎盘组织比较，MEK1和FGFR1蛋白水平明显降低.③半定量分析显示MEK1和FGFR1分别减少75%和60%。结论FGFR1和MEK1的功能涉及很多信号通路，参与细胞增殖，分化和血管生成，胎盘发育和胎儿生长过程中也存在MEK1和FGFR1mRNA水平的表达, MEK1和FGFR1mRNA水平的表达的降低和胎儿生长受限的发病机制相关，MEK1和FGFR1在胎儿生长受限的发生过程中可能起到一定的作用。第三部分miR-424和靶基因MEK1和FGFR1的相关性研究及其在胎儿生长受限中的临床意义。目的探讨miR-424与其靶基因MEK1和FGFR1的关系，阐明miR-424和靶基因MEK1和FGFR1的关系在FGR中的作用，探讨FGR的发病机制和病因研究。方法采用Spearman等级相关进行胎盘组织中miR-424和MEK1的相对表达水平的相关性分析和miR-424和FGFR1的相对表达水平的相关性分析，以及胎盘组织中MEK1与FGFR1表达之间的相关性。结果①miR-424与MEK1呈明显负相关趋势（Spearman r=-0.667; p=0.001）。表达上调的miR-424抑制了MEK1mRNA的表达。②miR-424与FGFR1呈负相关趋势（Spearman r=-0.250; p=0.080），但没有达到统计学意义。表达上调的miR-424抑制了FGFR1mRNA的表达。③FGFR1与MEK1呈显著的正相关(Spearman r=0.34,P <0.0001)，具有统计学意义。FGFR1和MEK1mRNA的有协同作用。结论本研究结果表明，miR-424的异常高表达与FGR显著相关，在FGR的发生中，miR-424可能通过抑制FGFR1的转录后表达和MEK1转录和转录后表达而起作用，FGFR1和MEK1mRNA的低表达有协同作用。我们提出miR-424可能通过miR-424-FGFR1-MEK1-MAPK作用通路参与FGR的发生发展。这些发现可能为将来miR-424在FGR的预防和诊疗中提供新的靶点。