【摘 要】
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本论文以鸭胚源抗氧化肽TD12为研究对象,检测了TD12的体外抗氧化活性,过氧化氢诱导建立人肝癌细胞（HepG2）氧化损伤模型,应用分子生物学等手段考察了TD12对H2O2诱导损伤HepG2细胞的抗氧化酶活性、抗氧化系统中蛋白表达水平以及部分细胞因子分泌和基因表达的影响;利用RNA-seq技术测定HepG2细胞氧化损伤后在TD12作用下的基因表达谱,筛选出差异基因（DGEs）,并对DGEs进行GO
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本论文以鸭胚源抗氧化肽TD12为研究对象,检测了TD12的体外抗氧化活性,过氧化氢诱导建立人肝癌细胞（HepG2）氧化损伤模型,应用分子生物学等手段考察了TD12对H2O2诱导损伤HepG2细胞的抗氧化酶活性、抗氧化系统中蛋白表达水平以及部分细胞因子分泌和基因表达的影响;利用RNA-seq技术测定HepG2细胞氧化损伤后在TD12作用下的基因表达谱,筛选出差异基因（DGEs）,并对DGEs进行GO分析和KEGG信号通路分析,在基因水平探讨鸭胚源抗氧化肽TD12对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用及机理,为鸭胚源肽在氧化应激防护方面发挥的靶向作用提供数据支持。主要结果如下:1.TD12具有较强的体外抗氧化能力,其清除自由基能力和总抗氧化活性在0.25μmol/L～1 mmol/L的浓度范围内,TD12清除ABTS、DPPH、羟基自由基的能力呈浓度依赖型增强。2.TD12对HepG2细胞无毒性,也无促进或抑制生长作用;利用H2O2建立损伤模型适宜浓度为400μmol/L,干预时间为1 h;TD12对H2O2诱导损伤HepG2细胞有保护作用,在一定浓度范围内,呈浓度依赖型关系,还能降低由H2O2诱导引起的细胞内ROS的水平。3.TD12在一定浓度范围内能够提高由H2O2诱导损伤的HepG2细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性,能降低丙二醛（MDA）含量;还能够提高细胞中SOD1、CAT、LDHA蛋白的表达水平,使抗氧化系统中酶恢复稳定;对HepG2细胞中TNF-ɑ、IL-8、IL-4、IL-10等细胞因子的释放和m RNA表达量有一定的抑制和稳定作用,从而缓解氧化应激损伤带来的伤害。4.当HepG2细胞经H2O2诱导损伤后,损伤组与对照组相比,共有2843个DGEs,其中有1664个基因上调,1179基因下调;保护组与损伤组相比,共有282个DGEs,其中有89个基因上调,193个基因下调。对这些DGEs进行GO分析和KEGG通路富集分析发现,许多重要的基因受到了调控,它们涉及MAPK、NF-k B、FOXO、HIF-1、Cancer等信号通路。TD12还能够提高细胞中Nrf2、NQO-1、HO-1等蛋白和m RNA表达水平,降低Keap1蛋白和m RNA表达量。总之,鸭胚源抗氧化肽TD12有利于HepG2细胞的生存,可能是通过对MAPKs、Cancer以及Nrf2-Keap1等信号通路相关基因的转录调节来实现的。
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