目的:研究表明二仙汤(EXD)可有效启动下丘脑-垂体-性腺轴进而治疗青春期发育延迟,但对于其作用下丘脑上游机制不明确,本文研究其对Leptin/α-MSH/Kisspeptin通路的作用以明确二仙汤治疗青春期延迟的上游作用机制。方法:1.运用MOE等软件对EXD中主要成分与Leptin/α-MSH/Kisspeptin作用靶点进行分子对接研究。2.将90只3周龄雄性SD大鼠给予基础饲料适应性喂养3天后,随机分为两大组,一组10只作为正常对照组以基础饲料喂养;其余以高脂饲料喂养制备肥胖动物模型。至6周龄测定大鼠体重,体重超过正常组平均体重20%的视为造模成功,将肥胖大鼠随机分为5组,每组10只。实验组大鼠分别灌胃低中高浓度的EXD,正常对照组和空白对照组灌胃生理盐水,4周后全部处死,取材。HE染色观察睾丸组织形态的变化。Elisa检测大鼠血清T,LH,FSH,Leptin指标。WB检测下丘脑组织Kisspeptin,Kiss1 R,Leptin R蛋白含量的表达。IHC检测下丘脑组织Leptin和α-MSH阳性表达。结果:1.分子对接结果:淫羊藿苷ASE分值最高,与GPCRs的结合最稳定,且与多个残基存在相互作用,而脱掉糖基之后结合效果明显变差。此外,仙茅中的仙茅苷,知母中的知母皂苷BII苷元和黄柏中的黄柏内酯也表现出了与MC3R,Leptin受体和GPCRs的较好结合效果。2.至第10周龄末,与模型组大鼠相比,EXD实验组的睾丸重及睾丸系数均有明显升高(P<0.05)。与模型组相比,EXD实验组睾酮(T)和促黄体激素(LH)均有升高,促卵泡激素(FSH)和瘦素(Leptin)有所下降,其中LH,FSH,Leptin差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示,EXD实验组和正常对照组及阳性药组大鼠睾丸组织生精小管生长正常,生精细胞排列紧密。模型组出现部分生精小管壁薄,生精细胞数量明显减少,排列较杂乱,偶见脱落细胞。Western Blot结果显示EXD实验组大鼠Kisspeptin和Kiss1 R表达均有上升,其中Kiss1 R表达差异有统计学意义(P<0.05),EXD实验组和模型组大鼠Leptin R表达较正常组有所下降,但未见明显差异。免疫组化结果显示EXD实验组大鼠下丘脑组织α-MSH的阳性表达降低(P<0.05)。结论:二仙汤的主要成分与Leptin R等稳定结合,进而通过α-MSH起作用,一定程度上使Kisspeptin表达上调,从而有效启动HPG轴,促进大鼠青春期正常的生殖发育。