番鸭呼肠孤病毒感染是番鸭呼肠孤病毒（MDRV）引起的一种免疫抑制性传染病,给番鸭养殖业造成严重的经济损失。猴头菇多糖（HEP）是从猴头菇中提取的最重要的活性多糖,可以缓解MDRV对番鸭机体的免疫抑制,但其具体作用机制目前尚不清楚。Toll样受体（TLRs）是一类参与机体天然免疫的高度保守性蛋白分子,其中的TLR3可识别病毒的双链RNA,在宿主抵抗活病毒中发挥重要的作用。本研究旨在探索HEP对MDRV-YB₄株体外感染细胞中TLR3-TRIF-TRAF6信号转导通路的影响,为进一步解析HEP在调节MDRV所致的番鸭机体免疫抑制中的作用机制提供数据参考。本试验在通过MTT试验测定了 HEP在小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7细胞）上的安全浓度以及MDRV-YB₄株感染RAW264.7细胞的半数组织培养感染量(TCID₅₀)的基础上,将RAW264.7细胞分为病毒感染HEP治疗组、病毒感染HEP预防组、病毒感染组以及HEP对照组和空白细胞对照组,共计5组细胞。分别在病毒感染12 h和24 h后收取各个组的细胞样品,通过实时荧光定量PCR检测各组细胞中TLR3 mRNA的转录水平;通过Western blot检测各组TLR3、TRIF和TRAF6的蛋白表达量;以及通过ELISA检测病毒感染24 h后各组细胞培养上清中TNF-α、IL-10、IL-6、IL-1β、IFN-β的含量。结果:（1）在46.88 μg/mL～187.5 μg/mL浓度范围内,HEP是可以促进RAW264.7细胞体外生长;（2）MDRV-YB₄可在RAW264.7中感染复制,其TCID₅₀=10-3.46/0.1 mL;（3）荧光定量 PCR 结果显示,RAW264.7 细胞在 MDRV-YB₄ 感染后,TLR3 mRNA的相对表达量较空白细胞会极显著（p<0.01）增加,HEP预防组与HEP治疗组可使得TLR3 mRNA的相对表达量较MDRV-YB₄组极显著（p<0.01）降低;（4）蛋白免疫印迹分析结果显示,RAW264.7细胞在MDRV-YB₄感染后,TLR3、TRIF、TRAF6蛋白的表达量较空白细胞会极显著（p<0.01）增加,HEP预防组与HEP治疗组可使得三者的表达量均较MDRV-YB₄组极显著（p<0.01）降低;（5）ELISA检测结果显示,在细胞感染MDRV-YB₄24 h后,MDRV-YB₄组细胞上清液中TNF-α、IL-10、IL-6、IL-1β、IFN-β的含量较空白对照组均有不同程度的升高,HEP预防组、HEP治疗组与MDRV-YB₄组相比,除IFN-β的含量进一步升高之外,以上指标的含量均不同程度的降低。结论:HEP可从基因与蛋白水平抑制MDRV-YB₄感染早期过度活化的TLR3的表达;HEP对TLR3信号转导通路中的关键因子TRIF、TRAF6也有调控作用;HEP可以抑制MDRV-YB₄感染早期TLR3信号转导通路下游产物TNF-α、IL-10、IL-6、IL-1β的过度表达,同时可上调IFN-β的表达,帮助机体发挥抗病毒作用。