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传统体外受精(IVF)受精率维持在60-70%,然而,在精液常规正常的情况下,受精失败的发生率为5%-15%,受精低下(定义为25%)的发生率为20%,这类夫妇,再次发生IVF受精失败或者受精低下的发生率为30-50%。卵胞浆内单精子注射(ICSI)能成功避免大部分IVF周期中的受精失败的发生,因此当传统IVF失败时,可以考虑对这些IVF失败的卵母细胞再次显微注射。但是对受精失败的1天龄的卵母细胞行补救性ICSI后,结局并不好。我们进行了临床数据的回顾性分析来证明非男性因素不孕行传统体外受精失败后,对受精失败卵母细胞行补救性ICSI价值不大,这可能由于卵母细胞缺陷导致受精失败。已经有人提出卵母细胞缺陷导致传统体外受精失败,但是卵母细胞异常相关的检测却很难做到,尤其是无法建立相关的动物模型来解释这种异常。纺锤体和染色体是反映卵母细胞质量的微观结构,卵母细胞质量对卵胞浆内单精子注射的影响,是迟救性ICSI或者早救性ICSI后仍然未受精,或者受精后优胚率,妊娠率低的重要原因。所以,我们用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察卵母细胞内部纺锤体,染色体结构,而且我们第一次设立了对照组来进一步证实卵母细胞缺陷影响非男性因素不孕患者的IVF结局。第一章非男性因素不孕体外受精失败行ICSI的结局分析目的:探讨卵细胞内单精子注射(ICSI)对非男性因素不孕行体外受精(IVF)失败患者治疗结局的影响方法:回顾性分析2006年1月—2008年l2月由于第一周期常规体外受精(IVF)治疗中卵子完全不受精或受精率≤25%,行补救性ICSI的10个周期(补救性ICSI),以及因前次受精失败而在随后的治疗周期中采取ICSI方法受精的19个周期(后续性ICSI)的ICSI治疗结局。对照组为2007年因男方少弱精子进行第1次ICSI治疗的133个周期。结果:补救性ICSI组受精率,优胚率,植入率,妊娠率,分娩率均低于对照组,而且受精率与分娩率差异有显著性(P<0.05),优胚率,植入率,妊娠率差异有极显著性(P<0.01);后续性ICSI组植入率,妊娠率,分娩率分别为8.8%,21.1%,15.8%,均低于对照组的21.2%,45.1%, 39.1%,且有显著性差异(P<0.05),受精率两者分别为49.5%,63.5%,有极显著性差异(P<0.01)。优胚率后续性ICSI组低于对照组,但是差异无显著性。结论:(1)对于非男性因素不孕IVF失败患者,ICSI能避免受精失败,但是受精率以及妊娠结局受到卵母细胞的隐匿性异常的影响。(2)考虑ICSI的安全性,补救性ICSI适合作为IVF后受精失败的诊断手段而不是治疗目的。(3)补救性ICSI组(16-18小时)由于无妊娠结局,建议不推广此方法。第二章非男性因素不孕患者IVF受精失败MII期卵纺锤体及染色体分析目的:研究非男性因素不孕行IVF后受精失败的第2天卵母细胞微管、纺锤体的形态,染色体的排列,卵子激活障碍的情况。探讨纺锤体形态异常,染色体没有准确的结合到纺锤体上,微管排列异常不能形成纺锤体,是否参与了IVF受精失败的原因。方法:来自生殖中心非男性因素不孕行IVF后受精率低于25%,Day2仍未见分裂的MII卵母细胞(胞浆内未见原核,卵周隙内仅见第一极体,48h没有卵裂时确定为未受精卵母细胞)作为实验组(IVF FF组),因男性因素行ICSI治疗后Day2仍未形成原核的MII期卵母细胞作为对照组(ICSI NF组),同时,因男性因素行ICSI过程中未熟的卵母细胞进行体外培养后成熟卵母细胞作为对照组(IVM组)。采用免疫荧光法分别对IVF受精失败的MII期卵(IVF FF组),ICSI未受精卵(ICSI NF组)及体外成熟的MII期卵(IVM组)进行染色。采用anti-α-tubulin-FITC对微管纺锤体进行免疫荧光染色,PI对染色体进行染色。用Confocal进行免疫荧光观察并分别统计其纺锤体,染色体异常率;以及统计IVF FF组和ICSI NF组卵子激活率的差异。结果:一共有164个未受精卵子(其中IVF FF 93个,ICSI NF 71个)和56个IVM卵子参与实验, IVF FF组卵子纺锤体异常率和染色体异常率均显著高于ICSI NF组和IVM组(异常纺锤体率分别为80.6%、64.8%、57.1%;异常染色体率分别为91.4%、80.3%、75%),差异有显著性。而ICSI NF组与IVM组相比纺锤体和染色体异常率均没有统计学差异。IVF FF组和ICSI NF组卵子激活障碍的比率两组分别为16.1%、49.3%,差异有极显著性。结论:(1) IVF受精率低或者受精失败,卵母细胞的隐匿性异常发挥重要作用。(2)纺锤体和染色体是反映卵母细胞质量的微观结构,卵母细胞质量对卵胞浆内单精子注射的影响,是迟救性ICSI或者早救性ICSI后仍然未受精,或者受精后优胚率,妊娠率低的重要原因。(3) IVF受精失败组MII期卵母细胞纺锤体和染色体异常率明显高于男性因素行ICSI未受精组(P<0.05),卵母细胞的质量是其重要影响因素,也说明了临床上前次IVF受精失败组此次行后续性ICSI治疗植入率和妊娠率仍然显著低于因男性因素行ICSI组,卵母细胞的质量决定了治疗结局的差异。(4) ICSI NF组与IVM组相比纺锤体和染色体异常率均没有统计学差异(P>0.05),卵子激活障碍ICSI NF组显著高于IVF FF组,说明卵子激活障碍是男性因素行ICSI后仍然未受精的重要原因。