肠易激综合征（Irritable bowel syndrome，IBS）是临床上的常见疾病，因其缺乏形态学、生化等特异改变，病因至今尚不明确。胃肠动力异常、内脏感觉致敏以及神经精神的改变是IBS的主要临床特征。近年来的实验研究表明，IBS临床病人中存在5-羟色胺（5-Hydroxytryptamine，5-HT）、胃肠激素（如血管活性肠肽（vasoactive intestinal polypeptide，VIP）、P物质(substanceP，SP)）的异常以及免疫状态（如肥大细胞（Mast cell，MC））的改变。这些异常或改变可能与IBS的发病有关。调查显示，IBS中50%～100%的患者心理因素具有重要作用，表明中枢神经系统可能参与IBS的发病过程。其可能关系为：①抑郁、焦虑、紧张等情绪因素可通过脑-肠轴引起胃肠运动、分泌功能障碍，进而引起IBS的发作和加剧；②IBS的发作可能与情感障碍有共同的发病机制。一方面，存在于中枢神经系统中的神经递质如5-羟色胺（5-HT）等合成代谢异常，导致情感障碍。另一方面，外周中存在的5-HT，对肠道运动、内脏感觉传导、肠道吸收和分泌均有重要作用，外周5-HT水平升高是导致IBS发病的重要原因之一。可以说，IBS是一种伴有神经精神异常和胃肠道功能改变的生理心理疾病。中医认为本病的病机在于肝郁脾虚。患者多由于情志失调，恼怒抑郁，忧虑过度以致肝气郁结，失其疏泄，脾失健运，导致IBS临床症状的产生。治疗以舒肝解郁、调理气机为主。蜘蛛香是西南地区多民族共用的传统草药。其味辛、性热，功能为理气和中，散寒除湿，活血消肿。主治消化不良，腹泻，痢疾，风湿痹痛，腰膝酸软，脘腹胀痛，小儿疳积等症。现代研究表明其具有抑制胃肠道运动、镇静、镇痛、抗惊厥等药理作用。根据蜘蛛香民间用药的适应症和现代药理作用，及现代医学和中医药临床对IBS的治疗认识，推测蜘蛛香对于改善IBS患者的临床综合症状具有积极作用。本课题通过给予大鼠慢性不可预见性的应激并加以孤养建立模拟IBS临床症状的动物模型；并对蜘蛛香进行药效活性部位的筛选；在此基础上采用慢性应激致IBS大鼠模型，观察蜘蛛香对胃肠功能和神经精神活动的影响，并探讨其对脑/肠组织中5-HT及其代谢产物5-HIAA的含量、胃肠激素（如VIP、SP）的水平及免疫因素（如肥大细胞）的影响。一方面为其临床用于IBS的治疗提供实验依据，同时为丰富对“疏肝解郁”功效中药的认识，扩展其应用提供支持。1慢性应激致IBS大鼠模型的建立方法：160-180g SD雄性大鼠随机分为正常对照组和模型组。对照组大鼠7-8只/笼，不给任何刺激。模型组大鼠每笼一只孤养，并加以慢性不可预见性的刺激。禁水、禁食、昼夜颠倒、冷刺激、热刺激、致痛、制动、高速震荡等刺激因子在40天内随机安排，每日一种，每种刺激出现5次，每种刺激不能连续出现，使动物不能预料刺激的发生。以腹部回撤反射压力阈值和应激后两小时排便粒数为指标评价动物的胃肠运动功能和内脏感觉的变化；以敞箱行为评分和蔗糖水偏嗜度为指标评价动物的神经精神活动的变化；同时测定动物体重及摄食量的变化。结果：造模7天后，模型组动物排便粒数明显增加（P<0.05）；造模10天后，模型组动物疼痛压力阈值与最大耐受压力阈值明显降低（P<0.05）；造模20天后，模型组动物敞箱实验行为评分和蔗糖水偏嗜度明显降低（P<0.05）；造模前后模型组动物体重明显降低（P<0.05），摄食量无明显变化。结论：用慢性应激加孤养对大鼠进行刺激，可引起动物的胃肠运动亢进并使内脏感觉致敏，同时造成了动物神经精神活动的改变，模拟了IBS的临床症状特征，可作为一种有效的IBS动物模型，用于评价相关药物的作用。2蜘蛛香治疗IBS的作用和机制研究2.1蜘蛛香治疗IBS药效活性部位筛选2.1.1蜘蛛香对胃肠运动作用的药效活性部位筛选方法：小鼠每日腹腔注射利血平造模，并同时给药。给药并造模6日后测定动物的胃排空率和小肠推进率，观察蜘蛛香提取物（挥发油、缬草素、baldrinal）和蜘蛛香原粉、水煎液对胃肠运动的影响。结果：挥发油、缬草素、baldrinal和蜘蛛香原粉对于胃肠运动亢进均有抑制作用（P<0.05）。蜘蛛香原粉和挥发油作用最强，而缬草素和baldrinal作用次之。2.1.2蜘蛛香对神经精神作用的药效活性部位筛选方法：观察蜘蛛香提取物（挥发油、缬草素、baldrinal）和蜘蛛香原粉、水煎液对正常小鼠和利血平化小鼠自主活动的影响以及对小鼠悬尾不动时间的影响。结果：蜘蛛香水煎液、缬草素、挥发油、baldrinal对于神经精神活动异常均有改善作用。蜘蛛香水煎液、缬草素、baldrinal对于神经精神的作用相对较强，而挥发油成分的作用则相对较弱。结论：蜘蛛香对于胃肠道和神经精神的作用并不是某一活性部位单独作用的结果，而是各活性部位综合作用的结果。此外，由于缬草素成分容易降解，并且目前获得大量的蜘蛛香活性成分比较困难。所以本课题在后面的实验中以含有各活性部位的蜘蛛香全粉作为研究对象，探讨其对IBS的治疗作用及机制。2.2蜘蛛香治疗IBS的作用研究方法：160-180g的SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、蜘蛛香原粉1.4g/kg组、蜘蛛香原粉0.7g/kg组、蜘蛛香原粉0.35g/kg组、替加色罗组、氟西汀组。对照组7-8只/笼，不给任何刺激。其余各组，每笼一只孤养，并加以慢性不可预见性的刺激。造模并给药24天后，观察蜘蛛香对IBS模型大鼠腹部回撤反射压力阈值和应激后两小时排便粒数的影响；观察蜘蛛香对IBS模型大鼠敞箱行为评分和蔗糖水偏嗜度的影响；观察蜘蛛香对IBS模型大鼠体重及摄食量的影响。结果：蜘蛛香各剂量可增加IBS模型大鼠的腹部回撤反射压力阈值，其中1.4g/kg作用明显（P<0.05）；并可减少排便粒数，其中0.7g/kg与0.35g/kg作用明显（P<0.05）。蜘蛛香各剂量可增加IBS模型大鼠的敞箱行为评分，但作用不显著；蜘蛛香各剂量可提高IBS模型大鼠的蔗糖偏嗜度，其中0.7g/kg作用明显（P<0.05）；蜘蛛香各剂量对IBS模型大鼠的体重和摄食量无明显影响。结论：蜘蛛香对IBS模型大鼠胃肠功能及神经精神活动异常具有改善作用。表明蜘蛛香对改善肠易激综合征患者的临床症状具有重要作用，可抑制IBS病人的胃肠运动亢进，降低内脏敏感性并改善其神经精神状态。2.3蜘蛛香治疗IBS的作用机制研究方法：160-180g的SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、蜘蛛香原粉1.4g/kg组、蜘蛛香原粉0.7g/kg组、蜘蛛香原粉0.35g/kg组、替加色罗组、氟西汀组。对照组7-8只/笼，不给任何刺激。其余各组，每笼一只孤养，并加以慢性不可预见性的刺激。造模并给药24天后取材，用高效液相电化学检测法检测各组动物血清、结肠及下丘脑中5-HT及5-HIAA的含量；采用免疫组织化学方法对各组动物海马和杏仁核部位的5-HT进行染色，用imag-pro plus图像分析软件进行半定量分析；用放射免疫分析法测定各组动物血浆及结肠组织中VIP和SP的含量；采用甲苯胺蓝染色法对各组动物结肠肥大细胞（Mastcell，MC）进行染色。结果：造模后，模型组动物血清、结肠、下丘脑、海马及杏仁核中5-HT含量均增加，5-HIAA含量变化不明显。模型组动物血浆中VIP和SP含量与对照组相比均降低；结肠组织中SP含量明显增加，VIP含量无明显变化。模型组动物结肠中MC数量虽略有增加，但无统计学差异。蜘蛛香各剂量均能一定程度降低IBS模型大鼠结肠、下丘脑、海马和杏仁核中5-HT的含量（P<0.05）；蜘蛛香各剂量均能降低IBS模型大鼠结肠中SP的含量，蜘蛛香中剂量还能增加结肠中VIP的含量（P<0.05）；蜘蛛香各剂量均具有减少IBS模型大鼠结肠MC数量的趋势，但作用不显著。结论：慢性应激致IBS模型大鼠血、结肠与中枢5-HT含量异常，血与结肠组织中胃肠激素VIP、SP水平发生改变，并伴有结肠中MC的增加。这些变化可能是IBS模型大鼠胃肠功能异常和神经精神活动异常产生的机制。蜘蛛香通过降低中枢及结肠5-HT的含量，影响胃肠激素的水平和调节免疫状态等环节对IBS的临床症状进行改善。综上所述：慢性应激加孤养对大鼠进行刺激，可引起动物的胃肠功能和神经精神活动的异常，模拟了IBS的临床特征，可作为一种有效的IBS的动物模型用于相关药物研究。蜘蛛香治疗IBS药效活性部位筛选实验表明，蜘蛛香对胃肠道的作用和对神经精神活动的作用可能是蜘蛛香各活性部位综合作用的结果。蜘蛛香可以改善慢性应激致IBS模型大鼠的胃肠功能和神经精神状态的异常，表明其可以改善肠易激综合征患者的临床症状。其作用环节为：降低中枢及结肠5-HT的含量，影响胃肠激素水平和调节免疫状态。