第一部分烟草烟雾对小鼠骨骼肌细胞衰老的影响目的:探讨烟草烟雾(cigarette smoke extract,CSE)能否引起骨骼肌细胞衰老方法:培养成肌细胞(C2C12细胞株)诱导分化为骨骼肌细胞,骨骼肌肌球蛋白重链特异性MY-32抗体染色细胞,观察阳性细胞率。香烟烟雾暴露后,MTT法观察CSE对骨骼肌细胞活性的影响;β-半乳糖苷酶染色检测骨骼肌衰老细胞百分率。结果:分化后细胞阳性率达98%,细胞分化成功。MTT法显示,与对照组相比,浓度≤60mL/L的CSE在12h、24h干预下细胞生长活性并没有收到明显抑制,且差异无统计学意义(P>0.05),当浓度≥80mL/L的CSE时,细胞生长明显受到抑制(P<0.05)。CSE干预细胞24h后,在一定的浓度范围内(CSE≤60mL/L),随着CSE浓度的增加,β-半乳糖苷酶染色衰老细胞数量增加;当CSE>60mL/L.,继续增加CSE浓度时,细胞出现形态学改变,继而死亡,β-半乳糖苷酶染色衰老细胞数量呈下降趋势。结论:CSE可诱导小鼠骨骼肌细胞衰老。CSE干预细胞24h后,在一定的浓度范围内(CSE≤60mL/L),随着CSE浓度的增加,衰老细胞数量增加。第二部分烟草烟雾干预下小鼠骨骼肌细胞HDAC2表达对衰老的影响目的:探讨烟草烟雾(CSE)暴露下,研究小鼠骨骼肌细胞组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)的表达与衰老的关系。方法:培养分化好的骨骼肌细胞,观察60 mL/LCSE干预下对骨骼肌细胞在不同时间点(24h、48h、72h)HDAC2蛋白表达的影响。应用HDAC2激活剂四溴苯三唑(4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole,TBB)和阻滞剂丙戊酸为工具药对细胞进行干预。细胞分6组:对照组、CSE组、TBB组、TBB+CSE组、丙戊酸组、丙戊酸+CSE组。采用荧光定量PCR和Western blot方法分别检测HDAC2的mRNA和蛋白表达,β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞的百分率。结果:骨骼肌细胞在60mL/LCSE干预下,每个时间点的CSE组骨骼肌细胞HDAC2的表达均较同一时间对照组的表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。随着CSE干预时间的延长,骨骼肌细胞HDAC2表达下降。TBB在促进HDAC2的mRNA和蛋白表达的同时,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数减少;用HDAC2的特异性阻滞剂丙戊酸抑制HDAC2的mRNA和蛋白表达时,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加。结论:(1)烟草烟雾干预下小鼠骨骼肌细胞HDAC2的表达减少,并有时间依赖关系;(2)CSE可能是通过减少小鼠骨骼肌细胞HDAC2的表达诱导小鼠骨骼肌细胞衰老。