目的:lnc RNA DANCR与动脉粥样硬化关系十分紧密,但其作用机制尚不清楚。本研究将探讨lnc RNA DANCR及mi R-33a与ABCA1和ABCG1之间的关系及其作用机制,为深入研究以巨噬细胞脂质蓄积为基础的动脉粥样硬化的发病机制及临床诊疗方法提供新的思路和方向。方法:实验一:1、THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞。2、慢病毒转染巨噬细胞,使细胞内过表达DANCR、sh DANCR或者感染空病毒(DANCR RNAi sc或者DANCR Over sc)等,将其分为5组:空白对照组、DANCR RNAi、DANCR RNAi sc、DANCR Over以及DANCR Over sc。3、逆转录聚合酶链式反应检测mi R-33a及其靶基因ABCA1和ABCG1 m RNA的表达水平。4、蛋白免疫印迹法检测ABCA1和ABCG1的表达水平。5、双荧光素酶报告系统检测DANCR对mi R-33a报告基因活性的影响。实验二:1、THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞。2、慢病毒转染巨噬细胞,使细胞内过表达DANCR、sh DANCR以及转染mi R-33a mimics和mi R-33a inhibitor,将细胞分为7组:空白对照组、DANCR RNAi、inh-mi R-33a、DANCR RNAi+inh-mi R-33a、DANCR Over、min-mi R-33a、DANCR Over+min-mi R-33a。3、利用逆转录聚合酶链式反应检测ABCA1和ABCG1 m RNA的表达水平。4、蛋白免疫印迹法检测ABCA1和ABCG1的蛋白表达水平。5、液体闪烁计数法检测巨噬细胞内的胆固醇流出率。(6)高效液相色谱法测定巨噬细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量。结果:实验一:1、巨噬细胞内干扰DANCR表达后,mi R-33a的m RNA表达水平升高,报告基因活性降低,其靶基因ABCA1和ABCG1的表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、DANCR过表达时,mi R-33a的m RNA表达水平降低,报告基因活性增强,其靶基因ABCA1和ABCG1的表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验二:1、lnc RNA DANCR表达下调与mi R-33a inhibitor同时转染的细胞组,相比单纯干扰lnc RNA DANCR组,无论是ABCA1还是ABCG1m RNA的表达显著增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。当lnc RNA DANCR过表达与mi R-33a mimics同时转染时,无论是ABCA1还是ABCG1 m RNA的表达相比单纯过表达lnc RNA DANCR组明显减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、lnc RNA DANCR表达下调与mi R-33a inhibitor同时转染的细胞组,相比单纯干扰lnc RNA DANCR,胆固醇外流增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。lnc RNA DANCR过表达与mi R-33a mimics同时转染时,相比单纯过表达lnc RNA DANCR,胆固醇流出减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、lnc RNA DANCR表达下调与mi R-33a inhibitor同时转染的细胞组,相比单纯干扰lnc RNA DANCR,巨噬细胞内TC、FC和CE含量降低,而CE/TC升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。lnc RNA DANCR过表达与mi R-33a mimics同时转染时,相比单纯过表达lnc RNA DANCR的细胞组,巨噬细胞内TC、FC和CE含量升高,而CE/TC降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:实验一:lnc RNA DANCR通过抑制mi R-33a的表达,上调其靶基因ABCA1和ABCG1的m RNA和蛋白质表达水平。实验二:mi R-33a介导了lnc RNA DANCR调控巨噬细胞脂质蓄积。