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第一部分:EGF通过上调结直肠癌中CEA的表达促进肿瘤增殖
目的:探讨结直肠癌中EGF调控CEA表达促进肿瘤增殖及探讨其机制。
方法:MTT检测不同浓度EGF和西妥昔单抗对结直肠癌细胞增殖活性的影响;实时定量RT-PCR技术和免疫印迹技术结直肠癌细胞CEA在mRNA和蛋白水平的表达变化;裸鼠皮下移植瘤模型验证EGF及西妥昔单抗对Lovo细胞在体水平的影响;免疫组化技术检测移植瘤组织CEA表达;免疫蛋白印迹技术检测EGF对Lovo细胞 p-EGFR,p-Akt,p-MEK,p-Erk活性的影响;免疫蛋白印迹检测应用抑制剂后EGF对Lovo细胞CEA表达影响;利用siRNA技术沉默Lovo细胞CEA表达后检测EGF促增殖效应的变化;利用电转染质粒技术上调CACO2细胞中CEA表达后检测西妥昔单抗抑制增殖效应的变化。
结果:EGF促进CEA高表达细胞系Lovo增殖,同时上调CEA表达,西妥昔单抗对其抑制效应不明显;西妥昔单抗抑制 CEA低表达细胞系 CACO2细胞增殖, EGF对其促增殖效应不明显;结直肠癌细胞小鼠皮下移植瘤模型中发现,EGF促进肿瘤生长并上调肿瘤组织中CEA的表达,西妥昔单抗抑制肿瘤生长并下调CEA表达;EGF上调 Lovo细胞 CEA的表达是通过 Ras/Raf/MEK/ERK通路,而不是PI3K/Akt/mTOR通路;下调Lovo细胞CEA的表达可阻断EGF促细胞增殖的效应;上调CACO2细胞CEA表达可以阻断西妥昔单抗抑制细胞增殖的效应。
结论:EGF通过上调结直肠癌细胞中CEA的表达促肿瘤增殖。
第二部分:CEA作用结直肠癌中EGFR影响肿瘤增殖
目的:探讨结直肠癌中外源性CEA对EGFR通路介导的细胞增殖的影响。
方法:MTT检测不同浓度EGF和西妥昔单抗对结直肠癌细胞CACO2增殖的影响;细胞免疫荧光检测外源性 CEA与结直肠癌细胞的粘附作用;利用转染质粒技术上调293T细胞中CEA和EGFR的表达,在同时过表达CEA和EGFR的293T细胞中,用蛋白质免疫共沉淀方法检测其CEA和EGFR分子结合情况。
结果:外源性CEA对结直肠癌细胞CACO2细胞增殖无明显影响,但CEA可以影响西妥昔单抗抑制细胞增殖效应;细胞免疫荧光提示外源性 CEA能与 CACO2细胞粘附;同时过表达CEA和EGFR的293T细胞中存在CEA和EGFR结合。
结论:结直肠癌中外源性CEA可能通过与EGFR结合影响西妥昔单抗抑制肿瘤增殖效应。
目的:探讨结直肠癌中EGF调控CEA表达促进肿瘤增殖及探讨其机制。
方法:MTT检测不同浓度EGF和西妥昔单抗对结直肠癌细胞增殖活性的影响;实时定量RT-PCR技术和免疫印迹技术结直肠癌细胞CEA在mRNA和蛋白水平的表达变化;裸鼠皮下移植瘤模型验证EGF及西妥昔单抗对Lovo细胞在体水平的影响;免疫组化技术检测移植瘤组织CEA表达;免疫蛋白印迹技术检测EGF对Lovo细胞 p-EGFR,p-Akt,p-MEK,p-Erk活性的影响;免疫蛋白印迹检测应用抑制剂后EGF对Lovo细胞CEA表达影响;利用siRNA技术沉默Lovo细胞CEA表达后检测EGF促增殖效应的变化;利用电转染质粒技术上调CACO2细胞中CEA表达后检测西妥昔单抗抑制增殖效应的变化。
结果:EGF促进CEA高表达细胞系Lovo增殖,同时上调CEA表达,西妥昔单抗对其抑制效应不明显;西妥昔单抗抑制 CEA低表达细胞系 CACO2细胞增殖, EGF对其促增殖效应不明显;结直肠癌细胞小鼠皮下移植瘤模型中发现,EGF促进肿瘤生长并上调肿瘤组织中CEA的表达,西妥昔单抗抑制肿瘤生长并下调CEA表达;EGF上调 Lovo细胞 CEA的表达是通过 Ras/Raf/MEK/ERK通路,而不是PI3K/Akt/mTOR通路;下调Lovo细胞CEA的表达可阻断EGF促细胞增殖的效应;上调CACO2细胞CEA表达可以阻断西妥昔单抗抑制细胞增殖的效应。
结论:EGF通过上调结直肠癌细胞中CEA的表达促肿瘤增殖。
第二部分:CEA作用结直肠癌中EGFR影响肿瘤增殖
目的:探讨结直肠癌中外源性CEA对EGFR通路介导的细胞增殖的影响。
方法:MTT检测不同浓度EGF和西妥昔单抗对结直肠癌细胞CACO2增殖的影响;细胞免疫荧光检测外源性 CEA与结直肠癌细胞的粘附作用;利用转染质粒技术上调293T细胞中CEA和EGFR的表达,在同时过表达CEA和EGFR的293T细胞中,用蛋白质免疫共沉淀方法检测其CEA和EGFR分子结合情况。
结果:外源性CEA对结直肠癌细胞CACO2细胞增殖无明显影响,但CEA可以影响西妥昔单抗抑制细胞增殖效应;细胞免疫荧光提示外源性 CEA能与 CACO2细胞粘附;同时过表达CEA和EGFR的293T细胞中存在CEA和EGFR结合。
结论:结直肠癌中外源性CEA可能通过与EGFR结合影响西妥昔单抗抑制肿瘤增殖效应。