动态光散射（dynamic light scattering,DLS）技术是一种广泛用于表征颗粒（如蛋白、纳米粒子等）粒径及其分布的方法。因其具有灵敏度高、操作简便、无需洗涤、数据易处理等优势,在分析检测领域获得越来越多研究者的关注。DLS免疫分析方法是一种结合DLS技术与免疫分析技术的新型传感检测方法,具有灵敏度高、特异性好、反应迅速等优势。现有的DLS免疫分析技术主要通过目标物靶向操纵纳米粒子的分散和聚集,诱导其平均水化动力学粒径变化,随后使用动态光散射分析仪记录粒子粒径与待测物浓度之间的定量关系,从而实现待测物的灵敏检测。尽管该方法与传统ELISA相比具有更高的检测灵敏度,但是现有检测体系的免疫反应效率和DLS探针聚集反应效率偏低,导致该类方法的灵敏度有限,难以满足待测物高灵敏检测的需求。因此,如何有效放大免疫识别过程中纳米探针的聚集反应效率和免疫反应效率是提升DLS免疫分析技术检测灵敏度的关键。本研究拟从改善DLS探针免疫反应效率和聚集反应效率等角度出发,系统研究提升DLS免疫分析技术检测灵敏度的新思路和新方法。设计和构建新型纳米粒子交联策略放大DLS探针的聚集反应效率有助于提高DLS免疫学方法的检测灵敏度。由于硼酸配体与顺式二醇的特异性相互作用,硼酸亲和材料在疾病诊断、细胞靶向、细菌鉴定和杀灭等领域受到越来越多的关注。凭借其对顺式邻二羟基分子的高度选择性,硼酸亲和材料已被广泛用于顺式二醇类物质的特异性分离和富集。与传统抗原-抗体反应不同,硼酸亲和反应可实现硼酸配体与含顺式二醇分子之间的多价结合,因此硼酸亲和材料可通过与顺式二醇类物质的特异性识别高效放大纳米粒子的交联,以实现灵敏的DLS信号转化。糖蛋白是一类具有重要生理学功能的顺式二醇类物质,参与多种生理及病理过程,对疾病早期诊断具有重要作用。氨基末端脑钠肽（amino-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-pro BNP）作为血清中的一种糖蛋白,是临床公认的早期诊断心力衰竭的生物标志物。本研究通过将硼酸亲和放大纳米粒子交联聚集与DLS免疫分析技术相结合,成功开发了一种超灵敏检测血清中NT-pro BNP的DLS免疫分析方法。其检测原理是利用单克隆抗体功能化的磁性纳米粒子（MNP@m Ab）从血清中分离和富集目标物NT-pro BNP,随后加入苯硼酸交联剂通过硼酸亲和反应诱导MNP探针发生交联聚集,获得目标物浓度依赖的粒径响应关系,从而实现目标物的定量检测。得益于多价和快速的硼酸亲和反应,该免疫分析方法检测NT-pro BNP的灵敏度低至7.4 fg/m L,检测时间20 min,样品用量1μL。此外,该免疫分析方法还具有较好的选择性、准确性、精密度、重现性和实用性。以上结果表明本研究所建立的基于硼酸亲和放大DLS免疫分析方法在快速、高灵敏检测血清等复杂样本中的糖蛋白方面具有较好的应用前景。抗原抗体反应具有特异性好等优势,但是传统单克隆抗体通过单价或双价识别目标抗原,存在反应效率低的缺陷。抗体的多价识别策略有效弥补了传统抗体识别的不足,使靶标的识别更加灵敏、高效。此外,多价抗体可同时提供多个抗原结合位点,因此可作为交联剂诱导目标抗原发生聚集,从而实现纳米标记探针的聚集。纳米抗体多聚化是目前实现抗体多价识别的主要策略之一。相比于传统的单克隆抗体,多聚化纳米抗体具有更高的亲和力和稳定性,有助于改善检测方法的灵敏度和重现性。C4b结合蛋白（C4b binding protein,C4bp）是一种常见的具有多聚化结构域的可溶性糖蛋白。利用C4bp具有多聚化的特点,本研究通过将AFP特异性纳米抗体（A1）与C4bp的C端片段融合组装形成了能够特异性识别AFP的纳米抗体七聚体（A1-C4bpα）,该七聚体拥有七个与AFP抗原结合的位点。在此基础上进一步将纳米抗体七聚体辅助的多价识别策略引入DLS免疫分析传感体系,成功建立了以七聚体为生物识别元件和交联剂、抗体功能化的MNPs作为检测探针的DLS免疫分析方法,用于血清中AFP的快速灵敏检测。纳米抗体七聚体与目标抗原之间的多价识别和复杂样品中待测物的磁富集使得该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。在最优的实验条件下,该DLS免疫分析方法检测AFP的最低检测限为15 pg/m L,定量范围为0.06-512ng/m L。此外,采用该方法检测AFP加标的血清样品,结果显示加标回收率介于80.80%-107.08%之间,批内、批间变异系数为3.23%-15.77%,且与其他干扰血清蛋白无交叉反应,表明该方法具有较好的精密度、准确性和特异性。该方法对于原发性肝癌的早期诊断、治疗以及预后评估具有重要意义。