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禽流感,是由A型流感病毒引起的从呼吸系统病变到全身败血症的一种高度接触性急性传染病,已导致家禽类及鸟类的普遍感染并对人类流行病的暴发造成了一定的威胁,严重影响养殖业生存和发展的同时对人类的公共卫生也造成相当大的危害。NS1蛋白(nonstructural protein1)是A型流感病毒重要的非结构蛋白之一,作为一个多功能调控因子其仅存在于被感染的细胞内,它的主要功能是抑制IFN-a/b(干扰素)介导的抗病毒作用,促进病毒基因表达,抑制宿主mRNA加工。人核仁螺旋体磷酸化蛋白(NOLC1),是本实验室在前期工作中筛选得到可与NS1蛋白相互作用的宿主蛋白。目前研究发现,NOLC1蛋白在核仁的发生、细胞分裂和细胞凋亡等过程中有重要的调控作用。本实验室在前期工作中已筛选得到能够与NS1蛋白相互作用的宿主蛋白NOLC1,并利用免疫共沉淀和His-pull down技术体内外验证两者的相互作用,同时采用荧光定位技术将两者共定位于细胞核。在此基础上,采用基因截短技术确定NS1蛋白的效应结构域(即NS1-C)与NOLC1蛋白相互作用。本研究基于前期实验的基础,利用基因截短技术、体外PCR定点突变技术以及His-pulldown技术将NS1-C区域继续截短、单点突变并验证截短体及突变体与NOLC1蛋白的相互作用。通过对NS1-C末端区域的空间结构进行分析,我们利用基因截短技术进一步确定了NS1-C末端区域与NOLC1蛋白相互作用的精确区域是NS1-C末端第104-200位氨基酸所组成的蛋白区域;利用体外PCR定点突变技术对NS1-C末端区域进行单点突变,初步确定了NS1-C区域第120位D和第195位R是参与NS1-C与NOLC1蛋白相互作用的关键位点。本研究为深入了解NS1蛋白的功能提供帮助,也为进一步筛选抗流感病毒药物设计靶位提供重要的理论依据。