新型真菌漆酶基因的克隆及其表达调控的分子机制

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将漆酶保守序列引物扩增法与长距离反向PCR(LD-IPCR)技术相结合,建立了真菌漆酶基因的新型克隆体系,从栓菌AH28-2(Trametessp.AH28-2)中克隆得到三个漆酶同工酶基因(lacA、lacB和lacC)和一个漆酶假基因lcD。这些同工酶基因与其它担子菌漆酶在氨基酸水平上呈现出很高的相似性。lacA、lacB和lacC的5′-非编码区均存在多个可能的顺式作用元件一致序列,包括TATAbox、CAATbox、MRE、XRE和CreA结合位点,这三个基因5′-非编码区的平均G+C含量分别为59%、60%和52%。lacA和lacB的TATAbox位于起始密码子上游约-100bp处,与其不同,lacC的TATAbox位于-172bp。Cu~(2+)的存在对于Trametessp.AH28-2漆酶同工酶基因的表达是必需的,并且Cu~(2+)浓度的不同对同工酶的诱导效应不同,低浓度的Cu~(2+)(<0.5mmol/L)能够诱导产生LacA和一新型漆酶,而高浓度的Cu~(2+)(1-2mmol/L)只诱导合成LacA。
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