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目的:探讨建立一个经济实用、稳定可靠、重复性好的适于临床外科治疗研究的颈动脉粥样硬化狭窄(carotid atherosclerotic stenosis,CASS)的动物模型的条件,与临床结合并为临床研究提供有价值的理论依据以及实验依据;通过测量NF-KB、IGF-1的表达,探讨它们在CASS发生、发展中的作用,以求对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的治疗、预防开辟新的发展途径。
方法:
实验1:日本大耳白兔40只,采用血管内膜气体干燥损伤法在动物的颈总动脉上造成特定条件的损伤(160mL/min×15min),然后以特定高脂饲料(饲料中含2%的胆固醇和6%的花生油)喂养动物不同时间(30天,60天和90天),建立CASS模型。通过血脂测定、B超、DSA、HE染色方法评价各组动物血管狭窄程度,再观察其病理改变特点。
实验2:按实验1得到的建立模型的方法,将制成CASS模型的30只动物和作为对照组的2只,在麻醉下分离颈总动脉后灌注固定取材。应用免疫组化方法观察NF-KB和IGF-1变化,评价各组动物AS斑块中NF-KB和IGF-1的表达特点。
结果:
实验1:平均狭窄率计算为:30天组:26.59%±4.81%;60天组:49.12%±2.96%,90天组:71.53%±3.65%,90天组中中重度狭窄达到80%。病理检查证实:随着高脂饲料喂养时间的延长,AS狭窄在加重,高脂喂养加干燥气体损伤30天时,可见脂纹期形成,内膜轻度增殖,内膜下少许泡沫细胞和脂质沉积;60天时,内膜增殖较重,内膜中见大量增殖的平滑肌细胞,大量泡沫细胞沉积,中膜变薄,纤维斑块形成;90天时,中膜进一步变薄,内中膜之间可见裂隙,粥样斑块形成。有些标本90天时,动脉的粥样硬化病理改变已属十较成熟的粥样斑块期。
实验2:正常血管的内膜和中膜内均未见明显的NF-KB、和IGF-1的表达,模型组血管斑块内NF-KB、IGF-1表达呈强阳性,主要位于细胞外基质中,偶见于泡沫细胞内,胞核中NF-KB略有表达。
结论:通过干燥气体损伤加高脂饮食成功建立了CASS模型,损伤后喂养90天的动物颈动脉狭窄程度和病理改变程度符合CASS外科治疗之实验研究需要;检测模型兔颈AS斑块NF-KB及其靶基因IGF-1的表达变化,可以看出其激活与AS病变的发生与发展密切相关,其在颈AS斑块形成过程中发挥重要作用。