驯鹿Ghrelin全长cDNA的克隆及序列分析

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脑肠肽是在中枢神经系统和胃肠道双重分布的多肽,对胃肠道功能起重要调节作用。Ghrelin是由日本科学家Kojima等在1999年发现的一种新的脑肠肽,是迄今为止唯一在体内发现的生长激素释放激素受体(GHS-R)的天然配体。Ghrelin在动物体内分布广泛,它不仅能刺激垂体前叶释放生长激素,还具有刺激食欲提高采食量、调节能量代谢等生物学活性。而且Ghrelin还与临床上的多种疾病关系密切,对临床疾病产生各种各样的影响。本研究利用驯鹿Ghrelin DNA部分已知的保守序列设计引物,从驯鹿皱胃黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR(Reverse Transcription PCR)技术扩增出驯鹿的Ghrelin cDNA的中间片段。然后分别采用3′和5′RAC(ERapid Amplification of cDNA Ends)法,成功的扩增了驯鹿Ghrelin cDNA全序列。驯鹿Ghrelin cDNA全长604bp,包含57bp 5′非翻译区(5′site Untranslated Region , 5′UTR)、402bp的开放读码框(Open Reading Frame,ORF)、终止密码子TGA、128bp的3′UTR和poly(A)14。ORF编码134个氨基酸残基的驯鹿Ghrelin前原肽,其中包含N末端41个氨基酸残基组成的信号肽、27个氨基酸残基组成的成熟肽及66个氨基酸残基组成的C末端肽。其成熟肽序列在1、4、5、6、7高度保守,成熟肽C末端的P-R(脯氨酸一精氨酸)结构为其识别部位。与不同种属动物Ghrelin前原肽比较,驯鹿Ghrelin前原肽的信号肽序列最长,其原因有待进一步研究。
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