蚊传播多种疾病,包括疟疾、登革热、西尼罗河热、丝虫病、日本脑炎等在内的许多传染病,严重危害人类健康。化学防治因其治理有效、使用方便等特点,始终是蚊媒控制策略中的重要手段。然而随着杀虫剂的大规模使用,蚊抗药性也随之产生且不断发展,加剧了蚊媒病的进一步传播。因此,蚊媒病防治的重点落在了蚊媒抗药性研究上。长期以来,研究者们致力于寻找新的抗性相关基因并以此深入探究抗药性机制。miRNA作为一类重要的转录后调控因子,通过与mRNA结合的方式来调节体内基因的表达水平。目前,昆虫中有关miRNA参与抗药性的研究多集中在组学方面,具体如何参与抗药性机制的研究则较少。本实验室前期采取solexa测序法发现miR-932在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达。本研究基于此发现,首先预测miR-932的靶基因,并采用实时荧光定量PCR进行表达量的验证,接着通过双荧光素酶报告系统鉴定miR-932和CpCPR5之间是否存在调控关系;随后,将CpCPR5的dsRNA基因注射入蚊体内来验证CpCPR5对蚊溴氰菊酯敏感性的影响;最后,通过基因注射的方式对蚊体内的miR-932进行高表达以及抑制表达,研究miR-932是否通过调控CpCPR5的表达来对蚊溴氰菊酯敏感性产生影响。主要研究结果如下:1.靶标预测提示,miR-932的种子序列可与CpCPR5的3’UTR序列完全互补配对;实时荧光定量PCR结果显示,miR-932在淡色库蚊抗性品系高表达,而CpCPR5在敏感品系高表达,提示二者之间可能存在调控关系。双荧光素酶报告系统检测显示,加入miR-932 mimic后可使转染了 pMIR-REPORT-UTR质粒的细胞的荧光读值降低,且存在浓度梯度趋势,进一步证实了 miR-932可在细胞内调节CpCPR5的表达。2.将针对CpCPR5设计的dsRNA注射入敏感品系的成蚊体内,实时荧光定量PCR结果显示,注射dsRNA蚊体内CpCPR5的表达量明显低于对照组,表明CpCPR5被成功敲低;用CDC Bottle Bioassay法检测各组蚊对溴氰菊酯的敏感性,结果显示,dsRNA注射组的死亡率明显低于对照组。3.将miR-932 mimic注射入敏感品系成蚊体内,实时荧光定量PCR结果显示,mimic组CpCPR5的表达明显低于对照组,提示miR-932可以在成蚊体内调节CpCPR5的表达;CDC Bottle Bioassay检测结果显示,接触溴氰菊酯后,miR-932 mimic注射组的死亡率低于对照组。4.将miR-932 inhibitor注射入抗性成蚊体内,实时荧光定量PCR结果显示,inhibitor组CpCPR5的表达明显高于对照组,进一步提示miR-932可以在成蚊体内调节CpCPR5的表达;CDC Bottle Bioassay检测结果显示,接触溴氰菊酯后,miR-932 inhibitor注射组的死亡率高于对照组。进一步提示miR-932参与了蚊抗药性的形成。本研究报告了淡色库蚊miR-932参与了抗药性的形成,而这个过程是通过调控靶基因CpCPR5的表达来完成的,该研究结果也为进一步阐明抗药性的分子机制提供了科学依据。