母猪产仔数是猪繁殖性状的一个重要指标,而猪胚胎附植成功与否是影响猪产仔数的一个非常关键的因素,所以研究影响猪胚胎附植的基因是十分有必要的。miRNA可以与靶基因3’UTR中的互补序列结合,从而在转录后水平影响基因的表达;而miRNA靶基因互补序列中的SNP又可以影响miRNA和靶基因的结合效率,最终影响基因的表达。本研究利用全基因组重测序数据和miRNA序列预测位于猪miRNA靶基因互补序列中的SNP,通过双荧光素酶报告实验验证发现WNT5A基因3’UTR的一个SNP显著影响miR-628-5p和WNT5A基因的结合效率,而有报道表明WNT5A基因可以影响小鼠的胚胎附植,随后我们运用免疫组化技术以及qPCR技术等对WNT5A基因进行了研究。得到的具体结果如下:(1)运用TargetScan软件结合猪64个个体全基因组数据以及猪miRNA序列,预测和筛选得到404个位于猪miRNA靶基因互补序列中的SNP位点,而且这些位点在互补序列中1到7位的位置分布比较均匀。(2)在杜长大三元猪个体中运用PCR和测序验证得到多个SNP位点与预测的一致,双荧光素酶报告实验验证得到WNT5A和VAV3基因3’UTR的SNP显著影响miR-628-5p和WNT5A的结合效率,以及miR-122和VAV3的结合效率。(3)用免疫组化技术在大白猪胎盘组织中检测了 WNT5A蛋白的表达。妊娠9天,WNT5A蛋白在大白猪子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞表达;妊娠15和18天,WNT5A蛋白均在大白猪滋养层细胞特异表达,且表达信号很强;妊娠26天,WNT5A蛋白在大白猪滋养层上皮细胞和腺上皮细胞中表达;妊娠50天,WNT5A蛋白在大白猪子宫内膜上皮细胞、滋养层上皮细胞和腺上皮细胞中都表达,但是表达强度都不高;妊娠95天,WNT5A蛋白在大白猪滋养层上皮细胞和腺上皮细胞中都表达,且腺上皮细胞表达比滋养层上皮细胞表达高。(4)通过RT-PCR检测WNT5A基因和miR-628-5p的组织表达谱,结果表明WNT5A基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉和绒毛膜组织中均有表达,说明WNT5A是广谱表达。miR-628-5p在上述各个组织中也均有表达,但是表达量很低。(5)用QRT-PCR检测了WNT5A在大白猪妊娠50天绒毛膜AA、AG和GG基因型中的表达量。WNT5A在GG基因型个体中表达量最高,而在AG基因型个体中表达量最低,GG基因型表达量高于AA基因型,但是差异不显著。而AA基因型表达量显著高于AG基因型表达量。(6)利用PCR-RFLP方法对WNT5A基因3’UTR多态性位点进行检测,发现WNT5A基因3’UTR中的miR-628-5p互补序列中的BcgI-RFL多态性位点与大白猪群体初生重性状没有显著关联,但与第一胎总产仔数有显著关联。