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目的:胃癌是全球第四大常见癌症,是癌症相关死亡的第二大主要原因。大多数胃癌患者被诊断时已处于晚期,因为早期胃癌通常无症状,而且,即使在根治性切除后胃癌也经常发生转移性复发。胃癌手术后治疗失败的最常见原因就是腹膜扩散,主要是由于原发灶胃癌中游离癌细胞的播种引起的,有肉眼可见的腹膜转移癌的胃癌患者预后非常差。炎症与癌症之间的联系已经被大家所熟知,目前已有研究发现,脱落致腹腔中的肿瘤细胞会优先定植在乳斑,而乳斑主要由未成熟的巨噬细胞组成。我们这项研究意图联系炎症与癌症之间的关系,证明巨噬细胞在与肿瘤细胞相互作用的情况下,能够形成富含TNF-α的炎症微环境,TNF-α进而通过MZF-1/Cx43的通路导致胃癌干细胞比例升高,从而促进胃癌细胞的腹膜转移。旨在为胃癌细胞发生腹膜转移的机制提供新的见解,进一步为临床开发抗胃癌腹膜转移的药物提供理论基础。方法:运用Transwell侵袭、迁移实验和划痕实验检测Cx43在胃癌细胞株HGC-27中的细胞功能。通过免疫组织化学染色法分析Cx43表达与腹膜转移发生之间的相关性。过表达Cx43后,通过WB实验检测Cx43与干性相关指标Sox2、Nanog和Oct4之间的联系。把巨噬细胞与胃癌细胞进行共培养,模拟腹腔内乳斑与游离肿瘤细胞的相互影响,之后通过WB实验检测胃癌细胞中Cx43与干性相关指标的表达。敲低Cx43后再次共培养,验证Cx43在其间的作用。通过Elisa实验检测了共培养培养基中的TNF-α水平。通过qRT-PCR实验检测巨噬细胞中TNF-α的mRNA水平。加入TNF-α刺激细胞后,通过WB实验检测Cx43与干性相关指标的变化。加入TNF-α刺激细胞后,检验肿瘤干细胞的成球能力。敲低Cx43后再次加入TNF-α刺激,验证Cx43在其间的作用。敲低MZF-1后进行WB实验和qRTPCR实验检测Cx43的表达。在TNF-α刺激下通过WB实验检测MZF-1蛋白表达。敲低MZF-1后再次共培养或加入TNF-α刺激,验证MZF-1在TNF-α及共培养调节Cx43及肿瘤细胞干性中的作用。结果:1、Transwell迁移、侵袭试验和划痕实验的结果显示,Cx43上调可促进癌细胞的侵袭与迁移。免疫组化结果显示,Cx43蛋白的表达与胃癌腹膜转移的发生密切相关。2、WB结果显示,Cx43过表达后,干性相关指标Sox2、Nanog和Oct4的蛋白表达均上调。3、WB结果显示,与巨噬细胞共培养的HGC-27及MKN-45有更高的Cx43及干性指标蛋白表达水平,并且敲低Cx43后,与巨噬细胞共培养原本引起的肿瘤细胞干性升高会受到抑制。4、Elisa实验结果显示,与单独培养的肿瘤细胞HGC-27、MKN-45以及单独培养的巨噬细胞的培养基相比,共培养培养基中的TNF-α水平升高。qRT-PCR结果显示共培养的巨噬细胞中TNF-α的mRNA水平表达升高。5、WB结果显示,在TNF-α刺激作用下,胃癌细胞中Cx43、Sox2、Oct4、Nanog的蛋白表达量逐步升高。肿瘤干细胞成球实验结果显示,在TNF-α刺激作用下,肿瘤球形成的大小和数量都显著增加。6、敲低MZF-1后,WB和qRTPCR结果显示Cx43表达下调。WB结果显示,在TNF-α刺激作用下MZF-1蛋白表达上调,MZF-1敲低后,下调了共培养或加TNF-α刺激时Cx43及胃癌细胞的干性指标蛋白的表达。结论:1、Cx43基因在胃癌细胞里可能起促癌基因的作用并与肿瘤干性相关,在患者体内表现为与腹膜转移的发生相关。2、当游离的胃癌细胞暴露于巨噬细胞时,巨噬细胞可分泌TNF-α,而TNF-α可通过上调Cx43的表达增强肿瘤细胞的干性。3、TNF-α可通过MZF-1调控Cx43的表达。