【摘 要】
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目的 研究兔自体骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）向软骨细胞方向诱导后复合自体“双相”骨基质明胶（bone matrix gelatin，BMG）对膝关节软骨缺损的修复作用。 方
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目的 研究兔自体骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）向软骨细胞方向诱导后复合自体“双相”骨基质明胶（bone matrix gelatin，BMG）对膝关节软骨缺损的修复作用。 方法 1．抽取兔胫骨骨髓，加入培养液混匀离心吸去上层脂肪及上清液后接种于培养瓶行原代培养，通过换液逐渐去除不贴壁细胞，获得贴壁生长的MSCS； 2．体外传代扩增以获得足够数量的MSCs，对其形态学进行观察，绘制生长曲线； 3．在细胞密集时加入诱导因子：转化生长因子-β1（transforming growth factor-betal，TGF-β1）、胰岛素样生长因子-Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ，IGF-Ⅰ）、维生素C（Vitamin C）进行诱导培养，使MSCs向软骨细胞方向分化，以获得组织工程种子细胞即软骨前体细胞，行免疫组化和Mallory染色观察诱导效果； 4．取自体兔髂骨，按照Urist的方法稍作改进对髂骨进行脱脂、脱钙、去蛋白等处理后得到“双相”BMG，按需修剪成一定大小和形状，灭菌后低温保存； 5．将诱导获得的软骨前体细胞接种于自体BMG上，构建细胞—载体复合物，体外培养三天后扫描电镜观察； 6．制作兔自体膝关节软骨缺损模型，分为三组，实验组植入自体细胞—载体复合物，实验对照组单纯植入自体BMG，空白对照组不植入任何材料，分别于第8周、第12周取材行大体观察、HE染色、免疫组化，并用Wakitani法进行组织学评分。 结果 1．骨髓悬液离心去除上层脂肪及上清液行原代培养，随换液可获得贴壁生长的MSCs，并能通过传代增殖获得大量MSCs；
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