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中性蛋白酶是最适作用pH介于6.0-7.5之间的一类蛋白酶，能将大分子蛋白质迅速水解成肽类和部分游离氨基酸，广泛用于食品、皮革和医药等行业。为了大幅提高中性蛋白酶产量，本论文以实验室保存的一株枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis SHB2010-1）为出发菌株，分别经过两轮的紫外线和硫酸二乙酯诱变处理，以脱脂奶粉培养基作为初筛鉴别培养基，经摇瓶发酵复筛，最后筛选得到一株高产中性蛋白酶菌株DES-59，酶产量较出发菌株提高了59.65%，达到7088U/mL。对菌株的产酶特性和补料策略进行了研究，结果表明：最佳碳源为玉米粉，最佳氮源为豆粕粉；磷酸盐能提高酶产量；未添加Na2HPO4和KH2PO4的情况下，Ca2+和Mg2+对产酶都有抑制作用；Na2HPO4和KH2PO4存在时，1mmol/L的Ca2+和Mg2+能使产量分别提高12%和8%，随着离子浓度的增加，产酶受到抑制；控制后期pH没能减缓酶活迅速下降；比较了4种补料策略，得到较好的补加策略即在11h、18h和24h分别补加10g/L玉米粉和7.5g/L豆粕粉，可使酶产量和生产强度分别提高96%和112%。采用响应面法（RSM）对以木薯渣为碳源产中性蛋白酶的培养基和发酵条件进行了优化。首先用Plackett-Burman设计对木薯渣浓度、豆粕粉浓度、麸皮浓度、起始pH、转速、培养温度、接种量和培养时间8个因素进行筛选，得到木薯渣浓度、豆粕粉浓度以及接种量三个显著影响因素；接着利用中心复合（CCD）响应面设计进一步优化，得到了最佳产酶条件：即木薯渣浓度为37.78g/L，豆粕粉浓度为15g/L，接种量为6.5%（V/V）。在此条件下进行验证实验，所得的实际中性蛋白酶产量为3849U/mL，与预测值3863U/mL接近，充分证明模型的可靠性。对中性蛋白酶提取工艺进行了初步研究，即发酵液经过离心，在上清液中添加硫酸铵至40%饱和度去除杂蛋白，然后在上清液中补加硫酸铵至60%饱和度沉淀得到目的蛋白，最后进行真空冷冻干燥得到中性蛋白酶粗品。其比活力为3191U/mg，纯化倍数为3.29，活力回收59.79%。粗品的活力为23万U/g。本论文系统地研究了产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌菌株诱变筛选、产酶特性、补料策略、木薯渣利用和酶初步提取工艺，为精细中性蛋白酶的工业化生产奠定了基础。