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新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的一种禽类急性高度接触性传染病,传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。目前,F蛋白是NDV主要的免疫保护性抗原和致病相关性抗原,在机体产生保护性抗体和免疫应答过程中有重要作用,VP2蛋白是IBDV的主要保护性抗原,与病毒中和抗体的诱导、抗原和毒力的变异等有关。近年来,ND与IBD病原体混合感染鸡体的现象越来越普遍,使得病情也越来越复杂,给养鸡业造成巨大损失,所以本实验将使用NDV-F与IBDV-VP2基因研制出新型的ND-IBD二联疫苗。CpG ODN（CpG oligodeoxynucleotides）是一种有效地免疫刺激剂,可以调节和增强DNA疫苗和基因工程疫苗的免疫效果,但在禽类ND和IBD疫苗的研究中却鲜有报道,所以本研究也进一步探讨CpG ODN对ND和IBD二联疫苗的免疫调节作用。本文以NDV-F与IBDV-VP2两个抗原为目的基因,克隆至具有人巨细胞病毒立即早期启动子（Human cytomegalovirus immediate early promoter,CMV）、截断型水泡型口膜炎病毒糖蛋白（Truncated vesicular stomatitis virus G protein,VSVGED）、土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件（Wood-chuck hepatitisvirus post-transcriptional regulatory element,WPRE）和腺病毒末端反向重复序列（Adeno-associated virus inverted terminal repeats,ITRs）等调控元件的假型杆状病毒转移载体pLMI中,通过Bac-to-Bac系统获得重组Bacmid DNA,将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-LMI-F-VP2。利用合成的CpG ODN作为免疫刺激剂与杆状病毒BV-LMI-F-VP2联合免疫鸡体,使其有效地刺激机体产生特异性保护抗体和较强的细胞免疫应答,比较分析CpG ODN作为免疫刺激剂对ND与IBD二联疫苗免疫效果的影响,为增强ND与IBD二联疫苗免疫效果奠定基础。利用实验室已构建BV-LMI-F、BV-LMI-VP2独株疫苗和本研究成功构建的BV-LMI-F-VP2二联疫苗+合成的CpG ODN分别免疫SPF鸡,并设置商品化疫苗组、空载体对照组、商品化佐剂对照组和PBS对照组。免疫实验结果显示:F-VP2免疫组免疫保护率高达90%,F和VP2单独免疫组免疫保护率均为20%,而对照组免疫保护率仅达到10%,各组间差异显著（p＜0.05）。F-VP2+CpG ODN共免疫组、F-VP2+无关序列（non CpG ODN）共免疫组和F-VP2+商佐共免疫组免疫保护率分别达到100%、90%和90%,各组间差异显著（p＜0.05）。说明重组杆状病毒二联疫苗可以刺激机体产生有效的免疫应答,且CpG ODN可以作为免疫刺激剂来提高疫苗的免疫效果。利用ELISA试剂盒检测不同免疫天数鸡血清中Ig G、IL-2、IL-4、IFN-γ、CD4+和CD8+含量,F、VP2、F-VP2重组杆状病毒疫苗组以及F-VP2+CpG ODN、F-VP2+non CpG ODN和F-VP2+商佐共免疫组血清抗体水平显著高于PBS对照组和空载体组（p＜0.05）。在42天时,IL-2（68.09 pg/mL VS 74.4pg/mL）、CD4+（70.31 ng/mL VS 80.71 ng/mL）和CD8+（46.38 ng/mL VS 51.56 ng/mL）的含量均达到最大,且两组间差异显著（p＜0.05）。F-VP2单独免疫组和F-VP2+CpG ODN共免疫组,在56天时,血清中Ig G（1.68 VS 1.81）、IFN-γ（61.49 pg/mL VS69.52 pg/mL）的含量均达到最大,且两组间差异显著（p＜0.05）。同时检测免疫血清中的中和抗体水平,在42天时,F-VP2+CpG ODN共免疫组抗体水平（1:1755）达到最高,与F-VP2单独免疫组抗体水平（1:1653）差异显著（p＜0.05）。此外,利用荧光定量检测鸡脾脏中TLR21、IL-1β、IFN-γ和IL-10的mRNA表达量。检测结果显示:F-VP2+CpG ODN共免疫组的基因上调表达为F-VP2免疫组基因表达量的1.38倍、4.37倍、8.54倍及0.63倍,为PBS对照组的基因表达量的3.09倍、8.80倍、12.47倍及0.18倍,各组间差异显著（p＜0.05）。以上结果均表明:重组杆状病毒二联疫苗能刺激鸡体产生较强的体液免疫与细胞免疫应答,CpG ODN可作为免疫刺激剂提高疫苗的免疫效果。本研究表明CpG ODN具有良好的佐剂活性,是一个有潜在应用前景的免疫佐剂,为研制新型新城疫疫苗开创了新思路。