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目的:本研究以氧化应激损伤所致的血睾屏障(blood-testis barrier,BTB)入手,以环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)制作损伤BTB的模型SD大鼠,通过前期已证实具有抗氧化作用的补肾活血中药“强精片”对模型动物进行干预,以BTB相关蛋白闭锁小带-1(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、纤维状肌动蛋白(fibros actin,F-actin),氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)以及p38 MAPK中关键蛋白p38蛋白为切入点,探讨补肾活血中药对受损BTB的作用靶点和修复机制,阐明不育症的中医发病机理,为中医药防治不育症奠定基础。方法:选取健康雄性SD大鼠50只,随机分为生理盐水腹腔注射空白对照组20只与CTX腹腔注射模型组30只。造模完成后,上述两组随机抽取10只大鼠取材检测,进行模型验证。将模型组余下的20只大鼠随机分成2组:强精片治疗组及模型对照组,每组10只。强精片治疗组给予中药等效剂量0.45g/kg·d(相当于临床人5.25g生药/60kg·d的6倍)灌胃,模型对照组以及模型验证后剩余的10只空白对照组给予等剂量生理盐水灌胃,两组灌胃每天1次,连续4周。实验结束后,采用计算机辅助精液分析检测大鼠精液指标变化。光镜下观察比较睾丸组织形态学。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测睾丸组织SOD、MDA水平。免疫组织化学S-P法染色检测紧密连接蛋白Occludin及Zo-1的表达。睾丸组织免疫荧光染色检测细胞骨架蛋白F-actin的表达。通过免疫印迹法(Western blot)检测睾丸组织Occludin、F-actin及p38蛋白的表达。结果:1.光镜下病理组织结构:造模后,大鼠睾丸曲细精管管壁可见生精细胞不同程度减少,管壁凹陷甚至塌陷,管壁变薄,管周基底膜增厚,管腔内精子不同程度减少;强精片治疗后大鼠睾丸曲细精管管壁生精细胞不同程度增多,管壁凹陷程度不同程度减轻,管壁厚薄较均匀,管腔内精子不同程度增多。2.模型对照组SOD明显低于正常对照组(P<0.05),MDA含量显著高于正常对照组(P<0.05);强精片组SOD明显高于模型对照组(P<0.05),MDA含量显著低于模型对照组(P<0.05)。3.造模后,Occludin、Zo-1免疫组化阳性染色明显减少,经4周自然恢复后,阳性染色略有增加的趋势;强精片组阳性染色较模型对照组明显增加。4.造模后,F-actin阳性荧光强度明显降低,经4周自然恢复后,阳性荧光强度有较明显的增加;强精片组阳性荧光强度较模型对照组强。5.造模后,Occludin、F-actin蛋白表达量明显下降(均P<0.05),p38蛋白表达量明显增加(P<0.05);经4周自然恢复后,Occludin、F-actin蛋白表达量均有所增加,p38蛋白表达量有所下降,但差异无统计学意义,强精片组Occludin、F-actin蛋白表达量较模型对照组明显增加(均P<0.05),p38蛋白表达量较模型对照组明显下降(P<0.05)。结论:1.环磷酰胺可增加睾丸组织MDA水平,降低SOD水平,上调p38蛋白表达水平,下调Occludin、Zo-1、F-actin蛋白表达水平,减少精子数量,表明环磷酰胺可能通过增加睾丸氧化应激水平,激活p38MAPK通路,减少BTB相关蛋白表达,损伤BTB。2.强精片可降低睾丸组织MDA水平,升高SOD水平,下调p38蛋白表达水平,上调Occludin、Zo-1、F-actin蛋白表达水平,增加精子数量,表明强精片可能通过降低睾丸氧化应激水平,抑制p38MAPK通路,恢复BTB相关蛋白表达功能,修复受损的BTB,改善精液质量。