【摘 要】
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近江牡蛎是我国四大贝类之一,富含蛋白质、多糖、维生素和矿物质。研究表明,贝类糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)具有降血糖、降血脂、抗氧化等多种生物活性,并且已经在功能食品、医药上广泛应用。关于近江牡蛎GAG的功能主要集中在免疫调节和抗肿瘤活性研究,而关于降血糖、降血脂等方面的研究尚未见报道。本研究以近江牡蛎GAG为研究对象,采用体外实验探究近江牡蛎GAG的降血糖和抗凝血活性;采
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近江牡蛎是我国四大贝类之一,富含蛋白质、多糖、维生素和矿物质。研究表明,贝类糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)具有降血糖、降血脂、抗氧化等多种生物活性,并且已经在功能食品、医药上广泛应用。关于近江牡蛎GAG的功能主要集中在免疫调节和抗肿瘤活性研究,而关于降血糖、降血脂等方面的研究尚未见报道。本研究以近江牡蛎GAG为研究对象,采用体外实验探究近江牡蛎GAG的降血糖和抗凝血活性;采用斑马鱼体内实验,探究近江牡蛎GAG降血脂活性和对肠道肠道菌群的影响,并初步阐明了其降血脂作用机制,为近江牡蛎GAG生物活性的探究及相关保健食品的开发利用提供理论依据。主要研究结果如下:(1)通过体外实验,探究近江牡蛎GAG的降血糖和抗凝血活性。结果表明,近江牡蛎GAG能够有效抑制α-葡萄糖苷酶活性,当浓度为0.4mg/m L时,抑制效果最佳,抑制率为43.68%。当0.4 mg/m L的近江牡蛎GAG反应时间为10 min时,抑制率达到最佳,为66.7%。动力学试验结果表明,近江牡蛎GAG通过反竞争抑制α-葡萄糖苷酶的活性,具有一定的降血糖功效。体外抗凝血活性实验结果表明,浓度为1 mg/m L的近江牡蛎GAG抗凝血原时间与0.1 mg/m L肝素钠的抗凝血原时间基本相同。近江牡蛎GAG使凝血复钙时间增加,呈现出较好的内源抗凝血效果。(2)以高胆固醇饮食喂食诱导高脂斑马鱼模型,探究近江牡蛎GAG的降血脂功效及其作用机理。结果表明,近江牡蛎GAG实验组斑马鱼血清和肝脏的TG、TC、LDL-c含量显著降低,HDL-c含量显著升高,说明近江牡蛎GAG可有效改善高血脂斑马鱼的脂代谢紊乱。通过转录组高通量测序和RT-q PCR技术,分析近江牡蛎GAG对脂代谢相关信号通路关键基因的表达的影响。结果表明,近江牡蛎GAG降血脂机制主要通过以下途径:(1)通过抑制pparγ、SCD、hmgra和acat2等脂代谢合成基因的表达,抑制脂质的生物合成和积累。(2)酮体生成限速酶HMGCS基因表达下调,促进了脂肪酸在分解代谢过程中产生酮体,减少脂肪酸的积累。(3)脂肪酸通过与脂肪酸转位酶CD36和脂肪酸结合酶FABP2、FABP6结合,使脂肪酸保持可溶性,运输到各个需要能量的细胞器,促进脂肪酸的排出。(4)胆固醇直接限速酶Hmgcr基因表达下调,减少胆固醇的合成,同时上调abcg5和cyp7a1基因的表达水平,进而增加胆固醇向胆汁酸的转化。(3)采用16sDNA高通量测序手段,研究近江牡蛎GAG对高胆固醇斑马鱼肠道菌群的调节作用。结果表明,近江牡蛎GAG干预4周后,能够有效提高高脂斑马鱼肠道微生物的多样性、丰富度以及肠道菌群分布的均匀度。近江牡蛎GAG了提高Bacteroidetes、Verrucomicrobia、Acidobacteria和Sphingomonas等有益菌的相对丰度,促进胆固醇的分解代谢,抑制病原菌的繁殖和有害酶的活性。同时,近江牡蛎GAG降低了proteobacteria、Cohaesibacter和Vibrio等有害菌的相对丰度,从而减少了致病的可能性并改善了炎症反应。此外,还降低了F/B的比值,这可能也是调节脂质代谢紊乱的一条途径。
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