【摘 要】
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目的:建立百草枯（PQ）致Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的模型,探索miR-130a-3p在此凋亡过程中的作用,并寻找验证其可能的下游靶基因。研究方法:建立PQ致小鼠的肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12细胞凋亡模型,通过不同浓度的PQ作用MLE-12细胞24h后,采用CCK-8法测定细胞活性,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率。根据评估结果选择合适浓度作为最佳浓度用于后续实验。在建好的凋亡模型中,采
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.81471851）《百草枯诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的调控机制研究》；
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目的:建立百草枯（PQ）致Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的模型,探索miR-130a-3p在此凋亡过程中的作用,并寻找验证其可能的下游靶基因。研究方法:建立PQ致小鼠的肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12细胞凋亡模型,通过不同浓度的PQ作用MLE-12细胞24h后,采用CCK-8法测定细胞活性,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率。根据评估结果选择合适浓度作为最佳浓度用于后续实验。在建好的凋亡模型中,采用Real-time PCR技术测定不同凋亡时间的miR-130a-3p表达水平。探索miR-130a-3p作用实验分为6组:（1）对照组:MLE-12细胞常规培养,加入等量PBS;（2）PQ组:MLE-12细胞加入PQ至80μM;（3）PQ+minics NC组:MLE-12细胞转染miR-130a-3p minics NC,加入PQ至80μM;（4）PQ+inhibitor NC组:MLE-12细胞转染miR-130a-3p inhibitor NC,加入PQ至80μM;（5）PQ+miR-130a-3p minics组:MLE-12细胞转染miR-130a-3p minics,加入PQ至80μM;（6）PQ+miR-130a-3p inhibitor组:MLE-12细胞转染miR-130a-3p inhibitor,加入PQ至80μM。各组细胞处理后继续培养,24h后收集上述各组的细胞,并分别检测相关指标:（1）用CCK-8法检测各组细胞活性;（2）用Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;（3）用Caspase3和Caspase9试剂盒检测各组细胞凋亡执行蛋白Caspase3、Caspase9的活性。运用miRDB网站预测miR-130a-3p下游靶基因,自噬相关基因-14（ATG-14）是其下游潜在靶基因之一。应用双荧光素酶报告基因实验确定miR-130a-3p和ATG14的靶向关系。结果:不同浓度PQ均引起MLE-12细胞活性下降和凋亡。80μM PQ作用细胞24h,细胞活性下降至58%,细胞凋亡率17%,以此为依据选择80μM PQ用于后续实验。在80μM PQ诱导MLE-12细胞凋亡模型中,miR-130a-3p表达在24h降低到最低。在评价miR-130a-3p在PQ诱导MLE-12细胞凋亡过程中所起到的作用实验中,与PQ组相比,PQ+miR-130a-3p minics组的细胞活性明显下降,凋亡率明显上升,凋亡执行蛋白酶Caspase3、Caspase9活性升高;PQ+miR-130a-3p inhibitor组的细胞活性明显上升,凋亡率明显下降,Caspase3、Caspase9酶活性下降,且以上差异均具有统计学意义。双荧光素酶实验证实miR-130a-3p mimics与ATG14野生型质粒共转24h时,与共转mimic NC组相比荧光素酶表达有显著性下降。实验结果提示,ATG14可能是miR-130a-3p的下游靶基因。结论:miR-130a-3p表达在PQ致AEC2细胞凋亡过程中发挥促进细胞凋亡作用,且ATG14可能是其潜在下游靶基因。
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目的:目前,鼻咽癌（NPC）发生局部复发和远处转移是鼻咽癌患者死亡的主要原因和治疗的主要障碍。然而有关鼻咽癌远处转移的特点及预后的报道尚不多见。因此,本研究的主要目的是探讨鼻咽癌不同组织学类型的转移模式,并阐明不同转移部位的预后特点,建立关于远处转移患者的预后预测模型。方法:本研究纳入SEER数据库中2010年至2016年的2758名患者,其中332名发生了远处转移。我们运用卡方检验比较发生远处转
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