【摘 要】
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共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid, CLA),是一种不饱和脂肪酸,膳食中摄入的CLA具有抗癌、抗动脉粥样化、降低胆固醇、促进骨骼生长等功能,目前,在工业合成的CLA往往异构
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共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid, CLA),是一种不饱和脂肪酸,膳食中摄入的CLA具有抗癌、抗动脉粥样化、降低胆固醇、促进骨骼生长等功能,目前,在工业合成的CLA往往异构体复杂,副产物的残留的安全性问题。直接添加可食用高产CLA的菌株,或通过该菌株生产高活性的单一CLA异构体作为食品添加剂,成为目前研究的热点。为了获得高产CLA的可食用菌株,进一步工业化生产CLA用于食品添加。本论文自酸奶中筛选产CLA的菌株,经18SrDNA鉴定后,利用盐析、Sephadex G-100、DEAE—纤维素离子交换层析,对其亚油酸异构酶进行分离纯化,利用酶活力和SDS-PAGE进行鉴定后,对筛选出的菌株进行离子束诱变和发酵条件的优化,结果表明:(1)从酸奶中筛选出一株产CLA较高菌株,经18S rDNA序列鉴定,该菌为酿酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae,亚油酸转化率为3.35%。(2)经60~80%硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤层析、DEAE—纤维素离子交换层析分离纯化后,经过酶活力测定和SDS-PAGE分子量检测,表明获得纯化的亚油酸异构酶,其分子量约为68.5kDa.(3)以筛选的酿酒酵母菌为出发菌株,经离子束诱变、筛选,得到正、负突变菌株,经过传代培养得到一株稳定遗传的高产CLA正突变菌株。(4)正突变菌株的最优发酵条件为:培养时间为42h、起始pH值为5.0、接种量为4%、培养温度为40℃。在该优化条件下添加0.1%亚油酸,CLA的产量为0.0898mg/mL,CLA的转化率为21%。
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