目的:唾液腺功能退化严重影响患者的生活质量与水平,从根本上解决唾液腺退化仍是医学上的一大难题。随着再生医学的发展,自体腺上皮样细胞注射为解决唾液腺功能退化提供一种新的治疗方案。本实验旨在研究牙髓干细胞诱导来源腺上皮样细胞与腺上皮细胞及牙髓干细胞之间在超微结构上的异同之处及其功能变化,为再生医学治疗唾液腺功能退化提供新的治疗思路。方法:1.原代细胞的培养与鉴定1.1牙髓干细胞培养与鉴定:收集人牙髓组织取自于本院正畸减数拔除的前磨牙。取出牙髓组织后,采用组织块酶消化法培养原代牙髓细胞,采用流式细胞术对细胞进行鉴定。1.2腺上皮细胞培养与鉴定:收集人体本院因颈部淋巴结清扫术后下颌下腺标本,采用组织块酶消化法培养原代腺上皮细胞,通过免疫细胞化学染色法对细胞进行鉴定。2.建立人牙髓干细胞与腺上皮细胞共培养体系:本实验采用transwell小室完成共培养体系的建立。牙髓干细胞第3代,以1×10~4个/ml密度接种于transwell下层培养室内进行培养（以下简称共培养细胞）,待细胞贴壁后,将人腺上皮细胞第三代,以4×10~4个/ml密度接种transwell上层培养室。单独培养的牙髓干细胞与腺上皮细胞作为对照,培养基每两天更换一次。共培养12天,每天观察细胞形态。3.透射电镜观察:选取第2、4、6、8、10和12天的共培养细胞,牙髓干细胞第3代与腺上皮细胞第3代,透射电镜观察和拍照。4.免疫细胞化学染色:选取第4、8、12天的共培养细胞,爬片成功后免疫细胞化学染色法鉴定CK-8和vimentin表达情况。5.唾液淀粉酶的测定:在共培养第2、4、6、8、10和12天去除上层腺上皮细胞,加入含有10%胎牛血清的培养液3ml,置于37℃恒温箱培养3天后,使用α-淀粉酶（AMS）测试盒测定其上清液中淀粉酶活性。6.CCK-8法测定增殖曲线:选取第2、4、6、8、10、12天共培养细胞,采用CCK-8法测定在其在450 nm处吸光度值。结果:1.在共培养过程中,共培养细胞出现了腺上皮样的多边形细胞,这些细胞紧密聚集,形成岛状结构,并在部分细胞岛的顶端可见串珠样气泡。这些细胞岛的数量在第8天达到顶峰后开始逐渐减少。在第10-12天共培养细胞逐渐转变为扁平状,紧密排列,细胞岛数量减少,串珠样分泌气泡减少甚至消失。2.在透射电镜下共培养细胞在第2天和第4天细胞内可见大量的线粒体,并可见许多核糖体及发达的粗面内质网;在共培养第6天可见细胞内可见少量的分泌颗粒样结构,并可见发达的粗面内质网,核糖体和线粒体的数量增多;在第8天分泌颗粒样结构数量进一步增多,并出现较多的空泡样结构;在第10和12天细胞内可见分泌颗粒样结构与空泡样结构数量减少,线粒体与粗面内质网未见明显减少。这些超微结构的改变明显区别于牙髓干细胞,与腺上皮细胞有着相似之处。3.免疫细胞化学染色显示:在共培养过程中,共培养细胞中vimentin表达逐渐降低,CK-8表达逐渐升高,在单独培养的牙髓干细胞中未发现此种改变,表明牙髓干细胞逐渐丧失间充质干细胞的特征,开始向上皮细胞转化。4.通过α-淀粉酶（AMS）测试法发现共培养细胞具有分泌唾液淀粉酶的能力,唾液淀粉酶活性随着共培养时间逐渐上升,在第8天达到顶峰后开始逐渐下降。共培养细胞上清中唾液淀粉酶活性与腺上皮细胞在第8至12天未见无明显统计学差异（P＞0.05）,两者均明显高于单独培养的牙髓干细胞（P＜0.05）。5.通过CCK-8法测定增殖曲线发现:在共培养的过程中,共培养细胞的平均吸光度值逐渐增高,在第4天开始进入对数期,在第8天达到顶峰。共培养细胞与牙髓干细胞平均吸光度值之间无明显的统计学差异（P＞0.05）,两者均明显高于腺上皮细胞（P＜0.05）。结论:1.牙髓干细胞在与腺上皮细胞共培养过程中可以转化为腺上皮样细胞,且增殖能力与牙髓干细胞无明显差异,明显优于下颌下腺来源的腺上皮细胞。2.牙髓干细胞在腺上皮细胞共培养诱导过程中自诱导第6天开始具备与腺上皮细胞相似的超微结构,超微结构变化与细胞光镜下形态、CK-8及vimentin表达变化及分泌功能变化基本一致,其中线粒体与粗面内质网可能在诱导过程中对细胞结构和功能转化起着重要作用。3.牙髓干细胞诱导来源腺上皮样细胞具有与腺上皮细胞同样的良好分泌功能,为解决腺体功能减退提供可靠的组织工程细胞来源。