【摘 要】
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目的：1.研究浙江地区汉族人线粒体DNA中COⅢ基因和剑桥标准序列之间的差异,查找COⅢ基因区域变异的位点.2.探讨变异位点是浙江汉族人的多态性位点还是引起2型糖尿病的突变位点
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目的：1.研究浙江地区汉族人线粒体DNA中COⅢ基因和剑桥标准序列之间的差异,查找COⅢ基因区域变异的位点.2.探讨变异位点是浙江汉族人的多态性位点还是引起2型糖尿病的突变位点.3.探讨线粒体DNACOⅢ基因变异与2型糖尿病主要临床指标及并发症的相关性.
方法：1.随机收集浙江地区汉族人群中无血缘关系的185例被确诊为2型糖尿病患者,详细记录每例患者的临床资料及主要生化指标.同时选取145例无糖尿病家族史和口服葡萄糖耐量正常者的血液标本作为对照.2.提取全血基因组DNA,用特定的针对整个COⅢ基因区域的两对引物扩增出PCR产物并纯化.3.对PCR纯化产物直接测序分析.4.使用生物信息学软件(DNAstar和Chromas)进行比对分析,查找变异位点.
结果：
1.浙江地区汉族人中COⅢ基因存在大量的变异位点.185例糖尿病患者组中112例有COⅢ基因变异,共计34个变异位点,145例正常对照组中101例有COⅢ基因变异,共计33个变异位点,对这两组的变异位点作统计学分析,它们在两组间分布都无统计学意义,推测它们可能是多态性改变.
2.糖尿病组中有34个变异位点(28个为同义突变和6个为错义突变);其中13个同义突变和5个错义突变在www.mitimap.org中均未见报道.对这6个错义突变在不同物种间进行保守性分析,它们都不是进化上的保守位点,推测为多态性现象.
3.把112例有变异点的糖尿病患者分为有家族史和无家族史,并作统计学分析,发现G9801A在两组间分布有统计学意义(P<0.05),且只在有家族史患者中出现.有家族史组与无家族史组比较:有家族史组女性患病率显著升高、平均发病年龄显著提前、病程显著延长、平均体重指数显著降低(P<0.05);其余生化指标均无统计学意义(P>0.05).
4.糖尿病患者并发有肾病组和无肾病组作统计学分析,发现C9449T、A9632G和T9856C三个变异位点只存在于有肾病组中,且在两组间的分布具有统计学意义(P<0.05).有肾病组与无肾病组比较:有肾病组平均发病年龄显著降低、病程显著延长、糖化血红蛋白显著升高(P<0.05).
5.C9827T只存在于有视网膜病变组,且在两组间分布有统计学意义(P<0.05).有视网膜病变组与无视网膜病变组相比:有视网膜病变组发病年龄、体重指数显著降低,病程显著延长(P<0.05).
6.有周围神经病变组中A9377G、G9575A与179540C,T9824C与T9540C,A9545G与T9540C同时出现变异.G9300A只存在于有周围神经病变组,且在两组间分布有统计学意义(P<0.05).有周围神经病变组中平均病程、餐后2小时血糖显著高于无周围神经病变组(P<0.05).
7.有高血压组的平均年龄、平均发病年龄、TC、LDL、BMI明显高于无高血压组(P<0.05).
结论：
1.线粒体DNACOⅢ基因区域存在大量变异位点,推测多为多态性现象.
2.C9827T,C9449T,A9632G,T9856c,G9801A和G9300A等变异位点可能与浙江汉族人群糖尿病患者的临床表现及并发症有密切联系,其中C9827T、T9856C、G9801A和G9300A未曾见报道,需要增大样本量和增加样本类型来进一步证实.
3.线粒体DNACOⅢ基因糖尿病的临床症状复杂,携带有不同变异患者的临床表现各不相同,即使携带有同一变异因个体不同而临床表现差异很大.
4.对于浙江地区汉族人群中2型糖尿病患者,我们除了传统的临床症状及生化指标检查外,还需作mtDNACOⅢ基因变异分析,特别是C9827T、C9449T、A9632G、T9856C、G9801A和G9300A等变异位点的检测,它们能够预测并发症,这样对2型糖尿病患者的早发现、早预防、早治疗,减少因并发症引起的致残率及致死率都具有极其重要的价值.
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