原发性肝癌是严重威胁我国人民身体健康的疾病之一,其肿瘤生长迅速、浸润力强、易复发和转移、且对化疗药物耐药是其治疗困难、疗效差、死亡率高的主要原因。到目前为止,对中晚期肝癌尚无特别有效的治疗药物。 一、研究目的: 1、观察华蟾酥毒基白蛋白纳米粒(Cinobufagin-BSA-NP,CNP)对裸鼠人肝癌(SMMC-7721)原位移植模型的抗肿瘤作用。 2、在体观察CNP对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用,并从凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达对其诱导肝癌细胞凋亡机理作进一步的探讨。 3、通过实验的周密设计和认真观察为临床应用CNP治疗原发性肝癌提供有益线索。 二、研究方法: 制备华蟾酥毒基白蛋白纳米粒并表征其理化性质。采用肝内隧道植入法,建立裸鼠人肝癌原位移植模型60只,随机分为纳米制剂(CNP)组、阳性对照组阿霉素(ADM)组、华蟾酥毒基(CINO)原药组和阴性对照组生理盐水(NS)组,每组各15只。各组均于造模后第12 d剖腹探察,测量肿瘤大小。于第13 d开始给药,CNP及CINO组剂量按1 mg/kg尾静脉注射,1次/日,d 1-10。阴性对照组注射生理盐水0.2 ml,尾静脉注射,1次/日,d 1-10。ADM组剂量按8 mg/kg,尾静脉注射,d1;每组留5只观察带瘤生存期,其余分别于停药后第二天引颈处死,眼球取血测肝肾功能、心肌酶谱和血常规的变化；解剖腹部测量肿瘤大小,计算抑瘤率；留取瘤组织、心、肝、脾、肺、肾组织行常规病理组织学检查；取部分瘤组织行透射电镜观察其超微结构及凋亡；TUNEL法检测瘤细胞凋亡指数；免疫组化(SP)检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。 三、研究结果: 原位移植肝癌模型(OTTMH)治疗前组间的肿瘤体积无显著性差异(P>0.05),使各组治疗前肿瘤大小具有可比性。CNP对原位移植肝癌模型具有显著的抗肿瘤作用；CNP组、CINO组和ADM组瘤体均明显缩小,以CNP组为显著(与NS组相比,P<0.01或P<0.05);对裸鼠原位移植性肝癌模型抑瘤率分别为CNP组69.6％、CINO组56.8％、ADM组63.3％,CNP组抑瘤效果优于CINO组,差别有统计学意义(P<0.05),CNP组与ADM组比较差别不显著(P>0.05);CNP、CINO组带瘤生存期延长,以CNP组较为明显(与NS组相比,P<0.01或P<0.05),ADM组带瘤生存期与NS组比较无统计学差异(P>0.05);CNP组荷瘤鼠的体重治疗前后无明显变化(P>0.05),肝功能转氨酶轻度升高,肾功能无明显改变,心肌酶谱肌酸磷酸激酶轻度升高,心、肝、脾、肺、肾等重要脏器形态学上未见明显改变；而CINO组及ADM组可见肝肾功能损伤明显-转氨酶明显升高、尿素氮、肌酐升高,心肌酶明显升高(以ADM组为显著);ADM组体重治疗后明显减轻,差异显著(P<0.05);组织病理学观察CNP组、CINO组及ADM组瘤组织以中重度坏死为主,NS组多以轻度坏死为主；透射电镜观察CNP组及CINO组肝癌细胞可见明显凋亡征象,ADM组及NS组凋亡不明显；TUNEL检测结果：肝癌细胞凋亡指数CNP组及CINO组均有增加(与NS组相比,P<0.05),ADM组凋亡不明显(与NS组相比,P>0.05);免疫组化结果显示:CNP组及CINO组瘤组织内Bcl-2阳性表达率均较低,表达强度较弱,Bax阳性表达率较高,且多呈中等以上强度表达,CNP组及CINO组瘤细胞Bax的阳性表达率分别为69.1％和51.8％,与NS组相比,差异具有显著性(P<0.05),而ADM组与NS组相比Bax表达未见明显增强(P>0.05)。 四、研究结论: 1、Cinobufagin-BSA-NP对裸鼠人肝癌原位移植模型有明显抗肿瘤作用。 2、Cinobufagin-BSA-NP抗肝癌作用较CINO作用强,并且可明显降低原药的毒性。 3、其抗癌机理可能与增强凋亡相关蛋白Bax表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。