论文部分内容阅读
研究背景:环氧化酶(cyclooxygenase,COX)又称前列腺素内过氧化合成酶(prostaglandin endoperoxide synthase),是前列腺素生成过程中的一种关键酶,有COX-1和COX-2两个亚型。COX-1为结构型酶,在大多数正常细胞中都呈稳定表达,被视为看家基因,具有多种生理功能,如保护胃粘膜、调节肾血流和血小板聚集等功能;COX-2为诱导型酶,静息时一般不表达,只有在细胞因子、生长因子及致癌物质等诱导下才迅速合成,表达显著增高,促使前列腺素类物质(prostaglandins,PGs)的合成,参与炎症反应等过程。近几年来,国内外一些研究发现在胃癌、结肠癌、肺癌和膀胱癌等恶性肿瘤中COX-2表达升高,表明COX-2过表达与肿瘤的发生、发展有密切关系。而另有一些临床和流行病学的研究则表明,非甾体类抗炎药物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NASIDs)能抑制一些肿瘤如家族性腺瘤性息肉病的生长,并使人们患结肠癌和其它胃肠道肿瘤的机率降低,从而提出了NSAIDs防治恶性肿瘤的新设想。 前列腺癌(prostate cancer,PCa)是美国等西方发达国家中男性常见的恶性疾病之一,也是癌性死亡的常见原因之一。近年来,随着我国人民群众生活水平的提高,生活方式的改变和平均寿命的延长,前列腺癌的发病率逐年增加,越来越多的前列腺癌患者被诊断出来,因此,探讨前列腺癌的发病机制和寻找有效的治疗方法是非常有意义的。已有一些研究表明COX-2及其抑制剂与前列腺癌相关,但迄今为止,COX-2过表达与前列腺癌等恶性肿瘤发生、发展之间的具体分子机制及选择性COX-2抑制剂抗肿瘤效应的具体机制尚无明确结论,各种研究方兴未艾。 本研究采用原位核酸分子杂交、免疫组织化学(SABC)法、Western blot法和酶联免疫吸附竞争法(ELISA)等方法首次研究了人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3m细胞系中COX-2基因与蛋白质表达,PGE2释放以及COX-2选择性抑制剂celecoxib对COX-2蛋白质活性和肿瘤细胞生长的影响,并结合对PC-3细胞系的研究结果,探讨COX-2、PGE2与前列腺癌这三者之间,COX-2过表达与PC-3m细胞系较PC-3博士学位论文 中文摘要细胞系具有更强侵袭性和转移性之间的相关性,以及选择性COX-2抑制剂对前列腺癌细胞的作用效果,为临床上前列腺癌的化学治疗和化学预防提供新的理论和新的方法。 第一章COX《基因在人雄激素非依赖性前列腺癌 PC—3禾 PC-3m细胞中的表达及意义 目的:研究COX-2基因及其蛋白质在人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3和PC-3m细胞中的表达,分析COX-2与前列腺癌发生发展之间的关系,探讨COX-2过表达与PC上m细胞系较PC上细胞系更具侵袭性和转移性之间的相关性。 方法:以PC上和PCIm细胞系为研究对象,分别利用原位核酸分子杂交,免疫组织化学pABC)法和 Western blot法检测 COX2基因及其蛋白质在 PCl和PC-3m细胞中的表达。 结果:1)PC3和 PCIm细胞中均有 COX上 InRNA的表达,二者染色强度差异不明显。 2)PCl和PC上m细胞中均有COXq和COX上蛋白质表达。 3)PCl和PCIm细胞中 COX工蛋白质表达较COXl蛋白质表达明显,PC习。细胞中COX一二蛋白质的表达量较PC-3细胞蛋白质的表达量稍低。 结论:l)同 PC上细胞系一样,PC上m细胞系中存在 COX1 mRNA及蛋白质表达。 2)COX2过表达与人前列腺癌的发生、发展有关。 3)COX上蛋白质的表达量与PC上m细胞系较PCl细胞系具有更强侵袭性和转移性无相关性。