论文部分内容阅读
本文分三个部分进行探讨： 第一部分：黄芩苷、栀子苷干预高脂喂养的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型减轻斑块形成的作用研究 目的：观察黄芩苷、栀子苷对高脂喂养的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的直接作用 方法：购买8周大小野生型雄性C57BL/6J小鼠10只，作为阴性对照组，及8周大小雄性ApoE-/-小鼠40只，体重22-25克。适应性喂养一周后，将9周龄ApoE-/-小鼠随机分为阳性对照组（高脂喂养组）、黄芩苷干预组（黄芩苷100mg/kg.d灌胃）、栀子苷干预组（栀子苷100mg/kg.d灌胃）、黄芩苷和栀子苷联合干预组（黄芩苷100mg/kg.d+栀子苷100mg/kg.d灌胃），灌胃干预12周。分别于药物干预前、药物干预6周及12周时经眶静脉取血分离血浆，应用生化分析仪检测不同时期小鼠血浆中的血脂水平，包括总胆固醇水平（Total cholesterol，TC）、总甘油三酯水平（Triglyceride，TG）、低密度脂蛋白水平（Low-density lipoprotein，LDL-C）以及高密度脂蛋白水平（High-density lipoprotein，HDL-C）；取小鼠主动脉根部（与心脏相连接的部位）行冰冻切片，油红O染色观察主动脉根部斑块的大小。 结果：与野生型C57BL/6J小鼠相比，高脂喂养的ApoE-/-小鼠主动脉根部脂质斑块面积明显增加。与阳性对照组相比，黄芩苷、栀子苷及联合干预后，主动脉根部粥样斑块面积明显减小。高脂饮食喂养的ApoE-/-小鼠较野生型C57BL/6J小鼠相比，体内总胆固醇TC，低密度脂蛋白LDL-C均有明显升高，高密度脂蛋白HDL-C则表现出明显的降低。栀子苷干预6周后即体现出明显的降低小鼠血浆中TC的作用，干预12周后则小鼠血浆中的TC和LDL-C水平明显降低。但是黄芩苷和联合用药对小鼠血浆中血脂水平未表现出明显的降低作用。 结论：黄芩苷、栀子苷及联合干预高脂喂养的ApoE-/-小鼠可明显减轻小鼠血管中动脉粥样硬化斑块的形成，栀子苷可明显降低血浆中的血脂水平。 第二部分：黄芩苷、栀子苷干预高脂喂养的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型对骨髓中树突状细胞的影响 目的：观察黄芩苷、栀子苷及联合干预高脂喂养ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠后，小鼠骨髓中树突状细胞（Dendritic cells,DCs）的变化；以明确氧化应激及炎症状态下，黄芩苷、栀子苷是否能够调节树突状细胞在骨髓中的生成和动员。 方法：购买8周大小野生型雄性C57BL/6J小鼠10只，作为阴性对照组，及8周大小雄性ApoE-/-小鼠40只，体重22-25克。适应性喂养一周后，将9周龄ApoE-/-小鼠随机分为阳性对照组（高脂喂养组）、黄芩苷干预组、栀子苷干预组、黄芩苷和栀子苷联合干预组，灌胃干预12周。药物干预12周后，分离小鼠骨髓中的DCs，将细胞密度调整至106 cells/mL。用FITC标记的CD11C流式抗体，FITC标记的CD80流式抗体，FITC标记的CD86流式抗体，以及PE标记的CD83流式抗体标记上述DCs，一抗标记后在4℃冰箱中孵育半小时，流式细胞仪检测，流式软件分析并统计数据结果。 结果：与普通野生型C57BL/6J小鼠相比，ApoE-/-小鼠骨髓中CD11C+,CD83+,CD80+和CD86+DCs的数量均明显升高。黄芩苷、栀子苷及联合干预后，小鼠骨髓中CD11C+,CD83+,CD80+和CD86+DCs的数量较阳性对照组相比均有明显降低，其中联合干预组降低骨髓中CD11C+,CD83+,CD80+和CD86+DCs的数量下降的最为明显。 结论：黄芩苷、栀子苷及联合药物干预均可以降低高脂喂养的ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠骨髓中CD11C+,CD83+,CD80+和CD86+DCs的数量，抑制氧化应激及炎症状态下 DCs在骨髓中的成熟和动员，这可能是黄芩苷和栀子苷减轻主动脉中斑块形成的重要机制之一。 第三部分：黄芩苷、栀子苷干预高脂喂养的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型对血清中炎性因子及斑块中树突状细胞浸润的作用 目的：观察黄芩苷、栀子苷及联合干预高脂喂养ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠后，小鼠动脉粥样硬化血管中及斑块内树突状细胞的变化；明确氧化应激及炎症状态下，黄芩苷、栀子苷能否通过抑制树突状细胞在斑块中的浸润，减轻斑块中的免疫炎症反应，延缓斑块的发生和发展。 方法：购买8周大小野生型雄性C57BL/6J小鼠10只，作为阴性对照组及8周大小雄性ApoE-/-小鼠40只，体重22-25克，适应性喂养一周后，将9周龄ApoE-/-小鼠随机分为阳性对照组（高脂对照组）、黄芩苷干预组、栀子苷干预组、黄芩苷和栀子苷联合干预组，灌胃干预12周。药物干预12周后，放血处死小鼠，收集血清，分离心脏及胸主动脉至腹主动脉髂总动脉分叉处，迅速置于液氮罐中再转移到-80℃冰箱冻存。利用免疫组化技术、Western Blot及RT-PCR技术检测动脉中CD11C和CD83的表达，同时用ELISA技术检测血清中肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factorα,TNFα）及白介素12（Interleukin12,IL-12）的水平。 结果：与普通野生型C57BL/6J小鼠相比，ApoE-/-小鼠血管中CD11C和CD83蛋白和mRNA明显升高。黄芩苷、栀子苷单独用药及联合干预后，小鼠血管中CD11C蛋白和 mRNA水平较阳性对照组相比均有明显降低，但是只有联合药物干预可以明显降低小鼠血管中CD83蛋白和mRNA的表达，黄芩苷和栀子苷单独应用效果并不明显，差异没有统计学意义。免疫组化技术检测斑块中CD11C+DCs在高脂喂养的ApoE-/-小鼠体内的表达水平明显高于阴性对照组。与阳性对照组相比，黄芩苷、栀子苷及联合干预均能明显降低斑块中CD11C+DCs的数量。CD83+DCs在高脂喂养的ApoE-/-小鼠体内的表达较阴性对照组相比明显升高。与阳性对照组相比，只有联合组中CD83+DCs的表达水平明显降低。黄芩苷、栀子苷干预后与阳性对照组相比未显示出明显的差异。ELISA技术检测促炎因子TNFα和IL-12的水平，与阴性对照组相比，高脂喂养的ApoE-/-小鼠血清中TNFα和IL-12的水平均明显升高。与阳性对照组相比，TNFα在联合组中的表达明显降低。黄芩苷、栀子苷干预后与阳性对照组相比未见明显差异。而与阳性对照组相比，黄芩苷、栀子苷及联合干预均可明显降低ApoE-/-小鼠血清中IL-12的水平。 结论：黄芩苷、栀子苷及联合干预均可以明显降低高脂喂养的ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠血管中CD11C蛋白和mRNA的表达及CD11C阳性树突状细胞向斑块部位的浸润，联合药物干预还表现出明显抑制小鼠血管中CD83蛋白和mRNA的表达及CD83阳性树突状细胞向斑块部位的浸润的作用，同时还能明显降低血清中树突状细胞相关促炎因子的表达，减轻氧化应激及炎症状态下树突状细胞向血管斑块的侵袭和浸润，抑制血管和斑块中免疫炎症反应的程度，这可能是黄芩苷和栀子苷减轻主动脉中斑块形成的重要机制之一。