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目的观察视觉发育关键期内年龄及视觉经验的改变对大鼠初级视皮层(visualcortex,VC)Ⅱ/Ⅲ层α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸受体(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptor,AMPAR,简称AMPA受体)GluR2/3亚单位表达的影响,进一步探讨GluR2/3受体在视觉可塑性中可能的作用机制。方法1.25只健康新生Wistar大鼠,随机分成5组:NP7、NP14、NP21、NP28及NP45,每组5只,在同样的环境下正常饲养,分别于生后7d、14d、21d、28d及45d麻醉、灌注、固定、开颅取脑,置于4℃4%多聚甲醛后固定过夜。4℃30%蔗糖溶液2次脱水至沉底,OCT包埋,行12μm冰冻切片,按照常规HE及荧光免疫组织化学步骤染色,荧光显微镜下观察GluR2/3亚单位在视皮层的表达情况,Olympus显微摄像系统采集图片,IPP6.0图像分析系统测定阳性细胞计数及平均光密度值(average optical density,AOD),实验数据均以均数±标准差((?)±s)的形式表示,SPSS16.0软件包进行统计学分析,不同发育时限的阳性细胞计数及AOD值比较采用单因素方差分析。2.15只健康新生Wistar大鼠,随机分成3组:MD21、MD28及MD45,每组5只,与第一部分正常组(NP21、NP28及NP45)在同样的环境下饲养,于生后14d缝合右眼,制作单眼形觉剥夺模型,继续饲养至21d,28d,45d灌注取材。实验步骤、图像采集及阳性细胞计数、AOD值的分析方法均同第一部分。正常组与单眼形觉剥夺组间采用独立样本t检验进行统计学分析。结果1.HE染色结果:正常大鼠视皮层结构清晰,各层神经元排列整齐。单眼形觉剥夺组大鼠剥夺眼对侧视皮层与正常大鼠比较未见明显异常。2.荧光免疫组织化学染色:荧光显微镜下观察,GluR2/3受体阳性反应产物呈绿色荧光,在大鼠皮层组织广泛分布。视皮层17区各层可见不同密度的阳性细胞分布,粗略观察可见Ⅱ/Ⅲ层分布较密集,Ⅰ层几乎未见明显阳性细胞,Ⅳ、Ⅰ及Ⅵ层中等密度。阳性部位主要位于细胞膜和胞浆。3.比较不同发育时期大鼠初级视皮层Ⅱ/Ⅲ层GluR2/3受体的阳性细胞计数及AOD值(×200视野)。阳性细胞计数:NP7为143.13±9.53,NP14为135.20±9.47,NP21为150.40±8.19,NP28为154.40±10.23,NP45为164.93±9.14,组间行单因素方差分析,P＜0.05,差异有统计学意义。AOD值:NP7为0.0545±0.0107,NP14为0.0655±0.0118,NP21为0.0848±0.0114,NP28为0.0967±0.0147,NP45为0.1051±0.0152,组间行单因素方差分析,P＜0.05,差异有统计学意义。由上可以看出GluR2/3受体阳性细胞计数及AOD值均随年龄增长呈现逐步递增趋势。4.单眼形觉剥夺组大鼠剥夺眼对侧视皮层Ⅱ/Ⅲ层GluR2/3受体表达产物较正常同龄组减少,表现为阳性细胞数量减少及阳性表达产物密度减低。GluR2/3受体阳性细胞数为:MD21为140.13±11.06;MD28为141.27±8.70;MD45为145.13±8.47。AOD值为:MD21为0.0656±0.0120;MD28为0.0813±0.0111;MD45为0.0893±0.0137。剥夺组视皮层的GluR2/3阳性细胞数量及AOD值均较正常组降低,差异有统计学意义。结论从生后7天到视觉发育关键期末大鼠视皮层Ⅱ/Ⅲ层GluR2/3受体表达的阳性细胞数量及AOD值,均随年龄增长呈逐步递增趋势,呈现年龄依赖性规律,推测GluR2/3的表达与视皮层突触成熟及功能发育相关,其年龄依赖性可能是中枢神经系统视觉发育及可塑性的重要机制。而单眼形觉剥夺大鼠剥夺眼对侧视皮层Ⅱ/Ⅲ层GluR2/3受体的表达量低于正常组,推测视觉发育关键期内的大鼠,单眼形觉剥夺可以影响GluR2/3受体的表达。说明关键期内大鼠视皮层GluR2/3受体的动态表达受视觉经验的调节,异常视觉经验可以影响视皮层的功能。