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目的本实验的目的是观察Rho激酶抑制剂—法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默对大鼠脊髓损伤的修复作用及其对体外培养的神经干细胞和雪旺细胞增殖的影响。为临床治疗脊髓损伤提供实验数据和奠定理论基础。方法体外实验：体外培养神经干细胞,雪旺细胞根据处理因素不同分各为六组(每组设六个副孔)：A为空白对照组,B加5μmol/L法苏地尔,C加10μmol/L法苏地尔,D加15μmol/L法苏地尔,E加20μmol/L法苏地尔,F经siRNA沉默RhoA基因组。相应处理后第3天,用RT-PCR, Western blot检测各组神经干细胞RhoA基因和蛋白的表达。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察细胞增殖情况；采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。连续5天用细胞计数法测定生长曲线。体内实验：雌性SD大鼠60只,体重200-250g,以半切法制成脊髓半横断模型。随机分成3组A组为单纯损伤组,B组为法舒地尔治疗组,C组RhoA基因沉默治疗组。于伤后1w、2w、4w、6w、8w进行BBB评分和斜板实验等运动功能检测。第4周取材行病理切片HE染色RT-PCR, Western blot检测各组脊髓组织RhoA基因和蛋白的表达。8周后取材,行辣根过氧化物酶示踪观察(horseradish peroxidase, HRP)及通过体感诱发电位观察神经电生理恢复情况。结果体外实验结果：给予相应处理3天后神经干细胞D,E,F组与A,B,C组相比RhoA基因和蛋白表达量明显降低(P<0.05),细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多。各组间差异有统计学意义(P<0.05)。E组与F组相比差异无统计学意义(P>0.05)。处理3天后雪旺细胞D,E,F组与A,B,C组相比RhoA基因和蛋白表达量明显降低(P<0.05),细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多。各组间异差异有统计学意义(P<0.05)。E组与F组相比RhoA基因和蛋白表达量有差异有统计学意义(P<0.05)。体内实验结果：伤后4周B、C两组大鼠后肢运动功能均有较明显恢复,C组较B组为快,其差异有统计学意义(P<0.05)。A组亦有所恢复,但程度较轻。病理观察A组未见神经轴索通过,B组和C组可见少量神经轴索样结构。B,C组与A相比RhoA基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),B组较C组降低的更明显(P<0.05)。HRP阳性神经纤维数B,C组较A组多(P<0.05)。B组略多于C组(P<0.05)。B,C组大鼠体感诱发电位的潜伏期、波幅优于A组(P<0.05),B组略优于C组(P<0.05)。结论Rho激酶抑制剂法舒地尔和RNAi介导的RhoA基因沉默的研究表明：在体外实验均能促进神经干细胞/雪旺细胞的增殖。但是,神经干细胞组给予法舒地尔最佳浓度处理和RNA干扰处理没有统计学差异(P>0.05)。雪旺细胞组给予法舒地尔最佳浓度处理和RNA干扰处理后RhoA基因和蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。体内实验这两种方法均够促进大鼠脊髓损伤后神经功能的恢复。伤后8周法舒地尔治疗组恢复程度优于RhoA基因沉默组,为临床通过RhoA/ROCK通路治疗脊髓损伤提供实验依据和新的治疗思路。