论文部分内容阅读
配合鱼粉饲料中的肌胃糜烂素(gizzerosine, G)是导致鸡、鸭、鱼等养殖动物发生肌胃糜烂、食欲不振、产卵率下降、吐黑、死亡等的原因物质,肌胃糜烂素是褐色鱼粉在直火干燥制造的过程中产生的,其引起病变的浓度范围是1mg/kg左右,生理毒性是鱼粉中组胺毒性水平的1000倍。引起致病的主要原因是能促进动物的胃酸大量分泌而致使胃粘膜发生病变。本文首先建立了肌胃糜烂素的高效液相色谱分析方法。鱼粉样品用80%乙醇提取,提取液经有机滤膜过滤后,用重氮联偶试剂衍生化发色。以ODS反相柱description gemini 5 u C18 110A(250 × 4.6mm)为分析柱,乙腈和醋酸钠缓冲液为流动相进行梯度洗脱分离,流速为1.0 ml/min,温度为40℃。结果显示:肌胃糜烂素在0.001-0.5 mg/ml浓度范围内呈良好的线性关系,y=8061.6x-120716,相关系数为R2=0.9942。该方法对肌胃糜烂素的相对标准偏差为0.75%,平均加标回收率为100.17%。该方法简单、快速、灵敏度高、重现性好,可用于鱼粉中肌胃糜烂素的分析和含量测定。研究了鱼粉中肌胃糜烂素的产生机制。通过物理、化学、生物等多个角度分析了肌胃糜烂素产生的具体过程,发现组胺是肌胃糜烂素产生的根本原因。鱼体在自然状态下不产生组胺,组胺的存在是由于细菌的大量繁殖导致鱼体腐败而产生的。利用半海水寒天培养基及组氨酸肉汤选择性培养液,组胺的纸电泳分析技术,对鲭鱼鱼肉中的组胺生成菌进行培养、筛选,分离得到1株组胺生成菌。通过酶试验初步探究了赖氨酸与肌胃糜烂素生成的关系。试验以鲭鱼为原料,分别在不同的组胺含量、温度、干燥时间、pH等条件下制得鱼粉,并利用高效液相色谱分析方法测得每种鱼粉中的肌胃糜烂素含量,得出结论:随着组胺添加量的增加,肌胃糜烂素的生成量成正比增加,在组胺含量为6000mg/kg的时候生成肌胃糜烂素最多为301.63mg/kg;随着干燥时间的延长,肌胃糜烂素的生成量先增加后减少,在最短加热时间1h时生成的肌胃糜烂素最少为198.51mg/kg,在加热时间为3h时生成的肌胃糜烂素最多为269.52mg/kg;随着干燥温度的增加,肌胃糜烂素的生成量先增加后减少,在130℃时,生成的肌胃糜烂素最多为225.02mg/kg;随着pH的增加,肌胃糜烂素的生成量先增加后减少,在pH6.6附近生成的肌胃糜烂素最多为63.96mg/kg。本试验还通过饲喂小鸡来验证肌胃糜烂素对小鸡产生的生理影响,选用广东地区的6只4日龄肉鸡为实验对象,分成2组,进行基础日粮饲养7天。在此基础上,实验组肉鸡每天分别口腔注射10mg/kg肌胃糜烂素标样,同时没有注射肌胃糜烂素的小鸡作为空白对照组。然后分别观察小鸡体重、外形变化情况,以及解剖后肉鸡胃、肝脏等的形态和肝脏的肌胃糜烂素含量的情况,以及胃液体积,pH和胃蛋白酶活性的变化。结果发现,实验组小鸡较正常组体重增长速率较小,有死亡现象,且小鸡腺胃外观肿大,有红色小斑点,肝脏颜色变浅,易碎,胃液量增多,pH值降低,胃粘膜出现糜烂。