【摘 要】
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目的 子宫内膜异位症(EMs)是一种雌激素依赖性女性疾病,目前认为,是子宫内膜腺体细胞和基质细胞异位至宫腔之外的部位而引发的,以不孕和疼痛为典型症状。蜕膜化是子宫内膜的一种特殊分化过程,是内膜胚胎着床和建立妊娠的基础。本研究旨在从前期芯片数据中筛选出分泌中期EMs组与正常组内膜组织中差异表达的lncRNA并进行验证。建立人子宫内膜基质细胞(HESC)人工蜕膜化模型并在其中研究lnc121610敲低
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目的 子宫内膜异位症(EMs)是一种雌激素依赖性女性疾病,目前认为,是子宫内膜腺体细胞和基质细胞异位至宫腔之外的部位而引发的,以不孕和疼痛为典型症状。蜕膜化是子宫内膜的一种特殊分化过程,是内膜胚胎着床和建立妊娠的基础。本研究旨在从前期芯片数据中筛选出分泌中期EMs组与正常组内膜组织中差异表达的lncRNA并进行验证。建立人子宫内膜基质细胞(HESC)人工蜕膜化模型并在其中研究lnc121610敲低对细胞增殖和分化的影响。探索lnc121610所受到的上下游分子的影响,为后续研究提供参考。方法 采用Q-RTPCR方法验证lnc 121610在EMs组与正常组内膜中的差异表达。在HESC细胞中敲低lnc121610,采用CCK-8法及EdU法检测细胞增殖;对HESC细胞敲低lnc121610后,进行人工蜕膜化,并在加入分化液当天(D0)、48 h(D2)、96h(D4)和144 h(D6)收集细胞用于分析RNA和蛋白水平的变化,采用ELISA、Western Blot及Q-RT PCR等方法检测细胞诱导蜕膜化情况。采用Q-RTPCR方法检测外源性BMP2对lnc121610表达的影响及敲低/过表达lnc121610后PRL和IGFBP1表达水平的变化;在HESC细胞中敲低lnc121610后加入分化液诱导至D4,采用Western Blot及Q-RTPCR方法检测lnc121610敲低后对分泌期SMAD1及其下游分子的影响。结果 与正常组比较,分泌中期EMs组内膜组织中lnc121610表达水平和BMP2表达水平明显降低。利用HESC进行人工诱导蜕膜化,蜕膜化标志PRL和IGFBP1基因、蛋白表达水平明显升高,细胞形态发生变化,表明人工蜕膜化模型构建成功。随着蜕膜化的进展,lnc121610的表达逐渐升高。lnc121610敲低组和对照组在EdU细胞阳性率、细胞增殖率、细胞核增殖蛋白表达等方面差异未见明显统计学意义。在诱导蜕膜化D2、D4和D6时,lnc121610敲低组细胞培养基中的PRL浓度和IGFBP1的蛋白表达水平明显低于对照组;在诱导蜕膜化D2、D4和D6时,lnc121610敲低组PRL和lGFBP1的RNA水平明显低于对照组。在细胞培养基中加入外源性BMP2,随着BMP2浓度升高,蜕膜化标志基因PRL和IGFBP1表达水平明显升高;lnc121610表达水平明显升高,而敲低/过表达lnc121610后,则PRL和IGFBP1的表达水平降低/升高。与阴性对照组及空白对照组比较,lnc121610敲低组分化期SMAD1、p-SMAD1、p-SMAD1/5/8蛋白表达明显降低。结论 Lnc121610在EMs中呈低表达;lnc121610可参与HESC细胞蜕膜化;lnc121610的敲低可抑制HESC细胞蜕膜化表型的建立;外源性BMP2可影响HESC细胞中lnc121610的表达;lncl21610的敲低可抑制SMAD1、p-SMAD1及p-SMAD1/5/8在细胞蜕膜化中的表达。
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