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增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS),因其瘢痕突起,发红,伴疼痛、瘙痒、关节部位畸形或功能受限,是临床上病理性瘢痕中的一种。近年来多项研究表明,TGF-β信号通路在增生性瘢痕的形成中起重要作用,且泛素特异性蛋白酶4((ubiquitin-specific protease,USP4)可增强TGF-β信号通路的水平,但在增生性瘢痕形成中,USP4对TGF-β信号通路的作用还未见报道。本课题前期研究显示在增生性瘢痕组织中USP4基因明显增高,且与TGF-β受体(TβRI)呈正相关;进一步利用USP4抑制剂作用于瘢痕成纤维细胞发现其能够显著降低TβRI的表达,提示其可能是通过调控TGF-β信号通路影响瘢痕组织形成。研究显示在创面修复过程中,重组人转化生长因子3(Recombinant human transforming Growth Factor beta-3,rh TGF-β3)能够明显抑制增生性瘢痕的形成[1],本实验第一部分,探究兔耳增生性瘢痕中USP4及TβRI是否高表达,利用临床上常用的治疗增生性瘢痕药物rh TGF-β3抑制兔耳增生性瘢痕的形成,探讨瘢痕抑制后USP4及TβRI的表达情况;第二部分利用USP4抑制剂Vialinin A[2],抑制USP4蛋白的表达,探讨干扰USP4对兔耳增生性瘢痕形成的影响,并检测TβRI、TGF-β1、Smad7的表达,探讨干扰USP4的可能通路。本实验在动物水平进一步研究了USP4对增生性瘢痕形成的影响,为临床防治增生性瘢痕提供理论依据。全文分为两个部分。第一部分:研究兔耳增生性瘢痕中USP4及TβRI的表达情况目的:探讨兔耳增生性瘢痕中USP4及TβRI是否高表达及其可能关系,研究USP4在兔耳增生性瘢痕形成中的重要作用。方法:以10只新西兰大白兔建立兔耳增生性瘢痕模型,并随机选取兔的左、右耳分别作为实验组和对照组,实验组注射rh TGF-β3细胞因子,对照组注射相同剂量的生理盐水,分别于术后第30天、60天取材,观察各组瘢痕组织的外观形态变化,并对瘢痕组织行HE、免疫组化检测,研究分析实验组及对照组中瘢痕组织的USP4、TβRI蛋白的表达情况及SEI。结果:1、与对照组相比,实验组能够显著改善兔耳瘢痕组织外观、降低SEI,两组SEI相比差异有统计学意义(P<0.05)。2、免疫组化结果显示与对照组相比,实验组USP4、TβRI表达降低,同一时间两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、rh TGF-β3能够显著抑制增生性瘢痕形成。2、兔耳增生性瘢痕中USP4、TβRI表达增高,且USP4与TβRI密切相关。第二部分:Vialinin A干扰USP4对兔耳增生性瘢痕形成的影响目的:探讨Vialinin A干扰USP4后对兔耳增生性瘢痕形成的影响以及可能的作用机制,并研究干扰USP4对兔耳增生性瘢痕的防治作用,为临床增生性瘢痕的治疗寻找新的有效的方案。方法:选择10只新西兰大白兔复制兔耳增生性瘢痕模型,并随机选取兔的左、右耳分别作为给药组和对照组,创面愈合后,给药组注射Vialinin A,对照组注射相同剂量的生理盐水,分别于术后第30天、60天取材,观察对比各组瘢痕组织,并对瘢痕组织进行免疫组化、HE及Western blot检测,研究分析给药组及对照组瘢痕组织TβRI、TGF-β1、Smad7的表达及SEI。结果:1、与对照组相比,给药组能够显著改善兔耳瘢痕组织外观、降低SEI,同一时间给药组与对照组SEI相比差异有统计学意义(P<0.05)。2、免疫组化结果显示与对照组相比,给药组USP4染色范围小,深度浅,说明USP4表达受到抑制。3、Western blot结果显示与对照组相比,给药组TβRI、TGF-β1表达降低,Smad7表达增高,同一时间两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1、Vialinin A能够干扰USP4,降低其表达,抑制兔耳增生性瘢痕形成。2、抑制TβRI及TGF-β1表达,提高其下游的Smad7的表达可能是干扰USP4抑制增生性瘢痕形成的机制之一。3、USP4可能是增生性瘢痕的治疗靶点之一。本实验主要是观察USP4对在动物水平对增生性瘢痕形成的影响,动物模型采用应用比较成熟的兔耳增生性瘢痕模型,将Vlialinin A作用于兔耳创面局部,通过对瘢痕增生指数、瘢痕组织TβRI、TGF-β1、Smad7的检测,探讨干扰USP4对增生性瘢痕形成的影响,为临床治疗增生性瘢痕寻找新的方案。