【摘 要】
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目的:探索人骨髓间充质干细胞来源外泌体（human bone marrow mesenchymal stem cell-derived exosomes,h BMSCs-Exo）在SH-SY5Y细胞氧化应激损伤修复中的作用机制。为临床上治疗中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）损伤及其相关后遗症提供新的思路和治疗措施。方法:将SH-SY5Y细胞分为6组:含等容积磷酸盐
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目的:探索人骨髓间充质干细胞来源外泌体（human bone marrow mesenchymal stem cell-derived exosomes,h BMSCs-Exo）在SH-SY5Y细胞氧化应激损伤修复中的作用机制。为临床上治疗中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）损伤及其相关后遗症提供新的思路和治疗措施。方法:将SH-SY5Y细胞分为6组:含等容积磷酸盐缓冲液的对照组（Control组）、不同浓度1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridine ion,MPP+组）（0.25、0.5、1、2、4 mmol/L）、0.25mmol/L MPP++5mmol/LN乙酰半胱氨酸组（MPP++NAC组）、0.25mmol/L MPP++人骨髓间充质干细胞条件培养基组（MPP++h BMSCs-CM组）、0.25mmol/L MPP++h BMSCs-Exo组（MPP++h BMSCs-Exo组）、0.25mmol/L MPP++无外泌体的人骨髓间充质干细胞条件培养基组(MPP++h BMSCs-CMexo-)组等六个实验组,通过MTT法、流式细胞术以及Western Blot等方法分别检测各组细胞增殖能力、胞内ROS含量、细胞凋亡以及相关蛋白的表达。分析以上各组实验结果,讨论h BMSCs-Exo保护神经元对抗氧化应激损伤的作用机制。结果:1.随着MPP+浓度的增加以及处理时间的延长SH-SY5Y细胞的存活率逐渐下降。24h组内各浓度梯度与48h、72h组内各浓度梯度之间有显著的统计学差异（p＜0.05）。各浓度梯度条件下48h组与72h组之间无显著统计学差异（p＞0.05）。与对照组相比MPP+组细胞的胞内ROS含量和细胞凋亡率明显升高（p＜0.05）。2.与MPP+组相比,MPP++NAC组细胞活性明显恢复（p＜0.05）,与MPP+组相比,MPP++NAC组细胞内ROS含量和细胞凋亡率显著下降（p＜0.05）。3.与MPP+组相比,MPP++h BMSCs-CM组细胞存活率显著恢复（p＜0.05）,细胞内ROS含量和细胞凋亡率显著下降（p＜0.05）。4.与MPP+组相比,MPP++h BMSCs-CMexo-组细胞存活率未见明显改变（p＞0.05）,细胞内ROS含量和细胞凋亡率均未见显著差异（p＞0.05）。5.与MPP+组相比,MPP++h BMSCs-Exo组细胞存活率显著恢复（p＜0.05）,细胞内ROS含量和细胞凋亡率显著下降（p＜0.05）,细胞线粒体膜电位显著升高（p＜0.05）,细胞LDH释放显著减少（p＜0.05）。与对照组相比,MPP+组细胞凋亡相关蛋白Bax表达增加,增殖相关蛋白p-Akt和抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,与MPP+组相比,MPP++h BMSCs-Exo组细胞Bax表达下降,p-Akt和Bcl-2表达增加（p＜0.01）。结论:1.MPP+可诱导SH-SY5Y细胞内活性氧含量增加,促进细胞凋亡,抑制细胞存活。2.h BMSCs-Exo可抑制MPP+导致的细胞内活性氧含量升高,维持线粒体膜电位,降低LDH释放、细胞凋亡,提高SH-SY5Y细胞存活率。3.h BMSCs-Exo可激活AKT途径,上调SH-SY5Y细胞Bcl-2蛋白的表达和降低Bax蛋白的表达。
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